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36、目前基因工程所用的質(zhì)粒載體主要是以天然細(xì)菌質(zhì)粒的各種元件為基礎(chǔ)重新組建的人工質(zhì)粒，pBR322質(zhì)粒是較早構(gòu)建的質(zhì)粒載體，其主要結(jié)構(gòu)如圖一所示。

（1）構(gòu)建人工質(zhì)粒時(shí)要有抗性基因，以便于                     。

（2）pBR32Z分子中有單個(gè)EcoRI限制酶作用位點(diǎn)，EcoR 1只能識(shí)別序列一GAATTC一，并只能在G與A之間切割。若在某目的基因的兩側(cè)各有1個(gè)EcoRI的切點(diǎn)，請(qǐng)畫出目的基因兩側(cè)被限制酶EcoRI切割后所形成的黏性末端。                    。

（3）pBR322分子中另有單個(gè)的BamHI限制酶作用位點(diǎn)，現(xiàn)將經(jīng)BamHI處理后的質(zhì)粒與用另一種限制酶BgIⅡ處理得到的目的基因，通過DNA連接酶作用恢復(fù)          鍵，成功的獲得了重組質(zhì)粒。說明                                      。

（4）為了檢測(cè)上述重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入原本無amp^R和tet^R的大腸桿菌，將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖三的結(jié)果（空圈表示與圖二對(duì)照無菌落的位置）。與圖三空圈相對(duì)應(yīng)的圖二中的菌落表現(xiàn)型是                 ，圖三結(jié)果顯示，多數(shù)大腸桿菌導(dǎo)入的是                  。

五、綜合題

（每空？ 分，共？ 分）

35、糖尿病是一種常見病，且發(fā)病率有逐年上升的趨勢(shì)。下圖是利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)胰島素的操作過程示意圖，請(qǐng)據(jù)圖回答。

（1）過程②必需的酶是            酶。

（2）能否利用人的皮膚細(xì)胞來完成①的過程？       ，為什么？                                              

                                                                  。

（3）若A中共有a個(gè)堿基對(duì)，其中腺嘌呤有b個(gè)，則③④⑤過程連續(xù)進(jìn)行5次，至少需要提供鳥嘌呤         個(gè)。

（4）在利用AB獲得C的過程中，必須用                切割A(yù)和B，再加入                 ，才可以形成C。

（5）在進(jìn)行基因工程操作過程中，胰島素基因必需與運(yùn)載體——質(zhì)粒結(jié)合后才能進(jìn)入大腸桿菌體內(nèi)，并且在細(xì)菌內(nèi)增殖。質(zhì)粒的化學(xué)本質(zhì)是一種                   。

（6）不同生物間基因的移植成功，說明生物共用一套                    。

34、下圖為利用生物技術(shù)獲得生物新品種的過程．據(jù)圖回答：

（1） 在基因工程中．A→B為____________技術(shù)。利用的原理是_______________，其中a為：_______________的過程，b過程使用的酶是___________________。

（2）B→C為轉(zhuǎn)基因綿羊的培育過程，c過程用到的生物技術(shù)主要有動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和______________技術(shù)．在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，需讓培養(yǎng)液中含有—定量的CO₂，其主要作用是_______________________。

（3）B→—D為抗蟲棉的培育過程，其中d過程常用的方法是__________________，要確定目的基因（抗蟲基因）導(dǎo)入受體細(xì)胞后是否能穩(wěn)定遺傳并表達(dá)，需進(jìn)行檢測(cè)和鑒定工作。請(qǐng)寫出在個(gè)體水平上的鑒定或方法過程：__________________________。

33、以重組DNA技術(shù)為核心的基因工程正在改善著人類的生活。請(qǐng)回答下列問題：

（1）獲得目的基因的方法通常包括                和                     。

（2）切割和連接DNA分子所使用的酶分別是               和                。

（3）運(yùn)送目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體一般選用病毒或             ，后者的形狀成   。

（4）由于重組DNA分子成功導(dǎo)入受體細(xì)胞的頻率          。所以在轉(zhuǎn)化后通常需要進(jìn)行             操作。

（5）將人胰島素基因分別導(dǎo)入大腸桿菌與酵母菌，從兩者生產(chǎn)的胰島素在功能和

        序列上是相同的。

32、降鈣素是一種多肽類激素，臨床上用于治療骨質(zhì)疏松癥等。人的降鈣素活性很低，半衰期較短。某科學(xué)機(jī)構(gòu)為了研發(fā)一種活性高、半衰期長(zhǎng)的新型降鈣素，從預(yù)期新型降鈣素的功能出發(fā)，推測(cè)相應(yīng)的脫氧核苷酸序列，并人工合成了兩條72個(gè)堿基的DNA單鏈，兩條鏈通過18個(gè)堿基對(duì)形成部分雙鏈DNA片段，再利用Klenow酶補(bǔ)平，獲得雙鏈DNA，過程如下圖。

在此過程中發(fā)現(xiàn)，合成較長(zhǎng)的核苷酸單鏈易產(chǎn)生缺失堿基的現(xiàn)象。分析回答下列問題：

（1）Klenow酶是一種________酶，合成的雙鏈DNA有________個(gè)堿基對(duì)。

（2）獲得的雙鏈DNA經(jīng)EcoRⅠ（識(shí)別序列和切割位點(diǎn)-G^↓AATTC-）和BamHⅠ（識(shí)別序列和切割位點(diǎn)-G^↓GATCC-）雙酶切后插入到大腸桿菌質(zhì)粒中，篩選含重組質(zhì)粒的大腸桿菌并進(jìn)行DNA測(cè)序驗(yàn)證。

①大腸桿菌是理想的受體細(xì)胞，這是因?yàn)樗黖________________________。

②設(shè)計(jì)EcoRⅠ和BamHⅠ雙酶切的目的是___________________________。

③要進(jìn)行重組質(zhì)粒的鑒定和選擇，需要大腸桿菌質(zhì)粒中含有_______________。

（3）經(jīng)DNA測(cè)序表明，最初獲得的多個(gè)重組質(zhì)粒，均未發(fā)現(xiàn)完全正確的基因序列，最可能的原因是_______________。

（4）上述制備該新型降鈣素，運(yùn)用的現(xiàn)代生物工程技術(shù)是____________________。

31、科學(xué)家將人的生長(zhǎng)激素基因與大腸桿菌的DNA分子進(jìn)行重組，并成功地在大腸桿菌中得以表達(dá)。但在進(jìn)行基因工程的操作過程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，便于重組和篩選。已知限制酶I的識(shí)別序列和切點(diǎn)是—G^↓GATCC— ，限制酶II的識(shí)別序列和切點(diǎn)是—^↓GATC—，據(jù)圖回答：

（1）過程①表示的是采取                   的方法來獲取目的基因。

（2）根據(jù)圖示分析，在構(gòu)建基因表達(dá)載體過程中，應(yīng)用限制酶         切割質(zhì)粒，用限制酶     酶切割目的基因。用限制酶切割目的基因和運(yùn)載體后形成的黏性末端通過          原則進(jìn)行連接。

   （3）人的基因之所以能與大腸桿菌的DNA分子進(jìn)行重組，原因是             。

（4）人體的生長(zhǎng)激素基因能在細(xì)菌體內(nèi)成功表達(dá)是因?yàn)?u>                  。

寫出目的基因?qū)�入�?xì)菌中表達(dá)的過程                                     。

（5）將得到的大腸桿菌B涂布在一個(gè)含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上，能夠生長(zhǎng)的，說明已導(dǎo)入了                  ，反之則沒有導(dǎo)入。

30、（多選）基因工程是現(xiàn)代育種技術(shù)中非常重要的一種手段，通過該技術(shù)課讓細(xì)菌生產(chǎn)人類的胰島素。以下相關(guān)說法正確的是                                                                                           （    ）

    A．人與細(xì)菌的DNA的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)相同         

    B．細(xì)菌與人類共用一套遺傳密碼

    C．能高效表達(dá)人胰島素基因的細(xì)菌是工程菌  

    D．基因工程育種可能存在生態(tài)安全問題

四、填空題

（每空？ 分，共？ 分）

29、（多選）關(guān)于限制性內(nèi)切酶的說法中，正確的是                                                 （    ）

    A．主要從真核生物中分離純化出來          

    B．能在特定的位點(diǎn)上切割DNA分子

    C．對(duì)目的基因和運(yùn)載體必需用兩種特定的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行切割，產(chǎn)生特定的黏性末

端

    D．一種限制性內(nèi)切酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列

28、（多選）在基因工程中，作為基因運(yùn)輸工具的運(yùn)載體，必須具備的條件有             （    ）

A．能夠在宿主細(xì)胞中復(fù)制，并穩(wěn)定地保存    

B．具有多個(gè)限制酶切點(diǎn)

C．必須是細(xì)菌的質(zhì)�；蚴删�體              

D．具有某些標(biāo)記基因

27、（多選）在判斷抗蟲基因是否成功轉(zhuǎn)入棉花基因組的方法中，屬于分子檢測(cè)的是（    ）

    A．通過觀察害蟲吃棉葉是否死亡

    B．檢測(cè)目的基因片段與DNA探針能否形成雜交帶

    C．檢測(cè)目的基因轉(zhuǎn)錄形成的mRNA與DNA探針能否形成雜交帶

    D．檢測(cè)目的基因表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)能否與特定抗體形成雜交帶