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以下是四種不同限制酶切割形成的DNA片段：     

(1)…CTGCA  

(2)…AC   

(3)GC…

(4)…G     

(5)    G…    

(6) …GC…G          …TG      CG…        …CTTAA     ACGTC…          …CG

(7) GT…     

(8)AATTC…  CA…             G…

請(qǐng)用DNA連接酶將它們連接起來:

____和_____能連接成_________________________                             ;

____和_____能連接成_________________________                             ;

____和_____能連接成_________________________                             ;

____和_____能連接成_________________________                             ;

以下是四種不同限制酶切割形成的DNA片段。

你是否能用DNA連接酶將它們連接起來？

14分）、某質(zhì)粒上有SalI、HindⅢ、BamHI三種限制酶切割位點(diǎn)，同時(shí)還含有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因。利用此質(zhì)粒獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的過程如下圖所示，請(qǐng)回答下列問題。

(1)將抗鹽基因?qū)�入煙草�?xì)胞內(nèi),使煙草植株產(chǎn)生抗鹽性狀，這種新性狀(變異性狀)的來源屬于______                          。

(2)如果將抗鹽基因直接導(dǎo)入煙草細(xì)胞,一般情況下，煙草不會(huì)具有抗鹽特性，原因是抗鹽基因在煙草細(xì)胞中不能復(fù)制，也不能______                    。

(3)在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí),應(yīng)選用______       和_____        _兩種酶對(duì)______           和_____               _進(jìn)行切割，以保證重組DNA序列的唯一性。

(4)基因工程中的檢測(cè)篩選是一個(gè)重要的步驟。為篩選出導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌，下圖表示運(yùn)用影印培養(yǎng)法(使一系列培養(yǎng)皿的相同位置上能出現(xiàn)相同菌落的一種接種培養(yǎng)方法)檢測(cè)基因表達(dá)載體是否導(dǎo)入了農(nóng)桿菌。

培養(yǎng)基除了含有細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖必需的成分外，培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B分別還含有______       、_____             _。從檢測(cè)篩選的結(jié)果分析，含有目的基因的是______       菌落中的細(xì)菌。為了確定抗鹽煙草是否培育成功，既要用放射性同位素標(biāo)記的______           作探針進(jìn)行分子雜交檢測(cè)，又要用一定濃度的鹽水澆灌煙草植株從        水平鑒定煙草植株的耐鹽性。

(5)將轉(zhuǎn)入抗鹽基因的煙草細(xì)胞培育成完整的植株需要用_______          技術(shù)，愈傷組織經(jīng)______               進(jìn)而形成完整植株,此過程除營養(yǎng)物質(zhì)外還必須向培養(yǎng)基中添加                      。

40.  ［生物——選修3:現(xiàn)代生物科技專題］(15分）

某質(zhì)粒上有SalI、Hi_ndm、BamHI三種限制酶切割位點(diǎn)，同時(shí)還含有抗四環(huán)素基因和抗氨 芐青霉素基因。利用此質(zhì)粒獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的過程如下圖所示，請(qǐng)回答下列問題。

(1)將抗鹽基因?qū)�入煙草�?xì)胞內(nèi),使煙草植株產(chǎn)生抗鹽性狀，這種新性狀(變異性狀)的來 源屬于______。

(2)如果將抗鹽基因直接導(dǎo)入煙草細(xì)胞,一般情況下，煙草不會(huì)具有抗鹽特性，原因是抗鹽 基因在煙草細(xì)胞中不能______，也不能______。

(3)在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí),應(yīng)選用______和______兩種隳對(duì)______和______進(jìn)行切割，以保證重組DNA序列的唯一性。

(4)  基因工程中的檢測(cè)篩選是一個(gè)重要的步驟。為篩選出導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌，下圖 表示運(yùn)用影印培養(yǎng)法(使一系列培養(yǎng)皿的相同位置上能出現(xiàn)相同菌落的一種接種培養(yǎng)方法)檢 測(cè)基因表達(dá)載體是否導(dǎo)入了農(nóng)桿菌。

培養(yǎng)基除了含有細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖必需的成分外，培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B分別還含有______、______。從檢測(cè)篩選的結(jié)果分析，含有目的基因的是______菌落中的細(xì)菌。為了確定抗鹽煙草是否培育成功，既要用放射性同位素標(biāo)記的______作探針進(jìn)行分子雜交檢測(cè)，又要用______方法從個(gè)體水平鑒定煙草植株的耐鹽性。

(5)將轉(zhuǎn)入抗鹽基因的煙草細(xì)胞培育成完整的植株需要 用_______技術(shù)，愈傷組織經(jīng)______進(jìn)而形成完整植株,此過程除營養(yǎng)物質(zhì)外還必須向培養(yǎng)基中添加                         。

下圖是利用質(zhì)粒（有抗四環(huán)素基因、抗氨芐青霉素基因和Sal I、BamH I、Hind Ⅲ三種限制酶切割位點(diǎn)）獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的培育過程，請(qǐng)據(jù)圖回答有關(guān)問題：

（1）將抗鹽基因?qū)�入煙草�?xì)胞內(nèi)，使煙草植株產(chǎn)生抗鹽性狀，這種新性狀的產(chǎn)生所依據(jù)的原理是           。從基因文庫中獲得的抗鹽基因可用          技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。

（2）如果將抗鹽基因直接導(dǎo)入煙草細(xì)胞，一般情況下，煙草不會(huì)具有抗鹽特性，原因是抗鹽基因在煙草細(xì)胞中不能               ，也不能合成抗鹽基因的mRNA。

（3）為了確定抗鹽煙草是否培育成功，既要用放射性同位素標(biāo)記的             作探針進(jìn)行分子雜交檢測(cè)，又要用一定濃度的鹽水澆灌的方法從個(gè)體水平鑒定煙草植株的耐鹽性。

（4）圖中將抗鹽基因?qū)�入質(zhì)粒，需用             限制酶對(duì)質(zhì)粒和                 進(jìn)行切割。

（5）煙草組織細(xì)胞具有                 ，因此，可以利用組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入抗鹽基因的煙草組織細(xì)胞培育成植株。圖中①、②依次表示組織培養(yǎng)過程中香蕉組織細(xì)胞的              、                    。在形成愈傷組織的過程中，細(xì)胞的新陳代謝類型是                 。

40．【生物——選修3：現(xiàn)代生物科技專題】（15分）

下圖是利用質(zhì)粒（有抗四環(huán)素基因、抗氨芐青霉素基因和Sal I、BamH I、Hind Ⅲ三種限制酶切割位點(diǎn)）獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的培育過程，請(qǐng)據(jù)圖回答有關(guān)問題：

（1）將抗鹽基因?qū)�入煙草�?xì)胞內(nèi)，使煙草植株產(chǎn)生抗鹽性狀，這種新性狀的產(chǎn)生所依據(jù)的原理是           。從基因文庫中獲得的抗鹽基因可用          技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。

（2）如果將抗鹽基因直接導(dǎo)入煙草細(xì)胞，一般情況下，煙草不會(huì)具有抗鹽特性，原因是抗鹽基因在煙草細(xì)胞中不能               ，也不能合成抗鹽基因的mRNA。

（3）為了確定抗鹽煙草是否培育成功，既要用放射性同位素標(biāo)記的             作探針進(jìn)行分子雜交檢測(cè)，又要用一定濃度的鹽水澆灌的方法從個(gè)體水平鑒定煙草植株的耐鹽性。

（4）圖中將抗鹽基因?qū)�入質(zhì)粒，需用             限制酶對(duì)質(zhì)粒和                 進(jìn)行切割。

（5）煙草組織細(xì)胞具有                 ，因此，可以利用組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入抗鹽基因的煙草組織細(xì)胞培育成植株。圖中①、②依次表示組織培養(yǎng)過程中香蕉組織細(xì)胞的              、                    。在形成愈傷組織的過程中，細(xì)胞的新陳代謝類型是                 。

番茄不易儲(chǔ)存與多聚乳糖醛酸酶（PG）有關(guān)，科學(xué)家將人工合成的反義多聚乳糖醛酸酶基因?qū)�入番茄，獲得轉(zhuǎn)基因延熟番茄，是番茄的存儲(chǔ)時(shí)間大大延長(zhǎng)。已知質(zhì)粒上有Pst I、Sma I 、Hind III 、 Alu I 等四種限制酶切割位點(diǎn)。下圖是轉(zhuǎn)基因延熟番茄培育過程的示意圖（a mpr為抗氨芐青霉素基因），其中1~ 4是培育過程中的相關(guān)步驟，I 、II是相關(guān)結(jié)構(gòu)或細(xì)胞。請(qǐng)據(jù)圖作答。

例1 在構(gòu)建含反義多聚乳糖醛酸酶基因的表達(dá)載體時(shí)，若用Sma I與Pst I完全酶切含目的基因的DNA后，反應(yīng)管中有________種片段。為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，實(shí)際操作中，一般應(yīng)選用限制酶___________，分別同時(shí)對(duì)_____________進(jìn)行切割。
例2 通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，可將帶有目的基因的T-DNA（重組質(zhì)粒）導(dǎo)入番茄細(xì)胞。導(dǎo)入番茄細(xì)胞的目的基因，通常插入到細(xì)胞核某一條染色體的DNA上，使目的基因的遺傳特性得以____________________。上述途徑所獲得的番茄，其后代并非每一個(gè)個(gè)體都含目的基因，原因是                   。
(3) 為了檢測(cè)番茄細(xì)胞是否導(dǎo)入了目的基因，可以采用特定的DNA分子探針進(jìn)行檢測(cè)，也可以向植物組織培養(yǎng)基中加入_______________，以篩選獲得導(dǎo)入上述重組質(zhì)粒的特定受體細(xì)胞。
向正常番茄細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入反義多聚乳糖醛酸酶基因后，發(fā)現(xiàn)多聚乳糖醛酸酶基因能正常轉(zhuǎn)錄形成mRNA，但細(xì)胞內(nèi)卻不再合成多聚乳糖醛酸酶（PG），其原因最可能是____________。

番茄不易儲(chǔ)存與多聚乳糖醛酸酶（PG）有關(guān)，科學(xué)家將人工合成的反義多聚乳糖醛酸酶基因?qū)�入番茄，獲得轉(zhuǎn)基因延熟番茄，是番茄的存儲(chǔ)時(shí)間大大延長(zhǎng)。已知質(zhì)粒上有Pst I、Sma I 、Hind III 、 Alu I 等四種限制酶切割位點(diǎn)。下圖是轉(zhuǎn)基因延熟番茄培育過程的示意圖（a mpr為抗氨芐青霉素基因），其中1~ 4是培育過程中的相關(guān)步驟，I 、II是相關(guān)結(jié)構(gòu)或細(xì)胞。請(qǐng)據(jù)圖作答。

例1  在構(gòu)建含反義多聚乳糖醛酸酶基因的表達(dá)載體時(shí)，若用Sma I與Pst I完全酶切含目的基因的DNA后，反應(yīng)管中有________種片段。為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，實(shí)際操作中，一般應(yīng)選用限制酶___________，分別同時(shí)對(duì)_____________進(jìn)行切割。

例2  通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，可將帶有目的基因的T-DNA（重組質(zhì)粒）導(dǎo)入番茄細(xì)胞。導(dǎo)入番茄細(xì)胞的目的基因，通常插入到細(xì)胞核某一條染色體的DNA上，使目的基因的遺傳特性得以____________________。上述途徑所獲得的番茄，其后代并非每一個(gè)個(gè)體都含目的基因，原因是                    。

 (3) 為了檢測(cè)番茄細(xì)胞是否導(dǎo)入了目的基因，可以采用特定的DNA分子探針進(jìn)行檢測(cè)，也可以向植物組織培養(yǎng)基中加入_______________，以篩選獲得導(dǎo)入上述重組質(zhì)粒的特定受體細(xì)胞。

向正常番茄細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入反義多聚乳糖醛酸酶基因后，發(fā)現(xiàn)多聚乳糖醛酸酶基因能正常轉(zhuǎn)錄形成mRNA，但細(xì)胞內(nèi)卻不再合成多聚乳糖醛酸酶（PG），其原因最可能是____________。

番茄不易儲(chǔ)存與多聚乳糖醛酸酶（PG）有關(guān)，科學(xué)家將人工合成的反義多聚乳糖醛酸酶基因?qū)�入番茄，獲得轉(zhuǎn)基因延熟番茄，是番茄的存儲(chǔ)時(shí)間大大延長(zhǎng)。已知質(zhì)粒上有Pst I、Sma I 、Hind III 、 Alu I 等四種限制酶切割位點(diǎn)。下圖是轉(zhuǎn)基因延熟番茄培育過程的示意圖（a mpr為抗氨芐青霉素基因），其中1~ 4是培育過程中的相關(guān)步驟，I 、II是相關(guān)結(jié)構(gòu)或細(xì)胞。請(qǐng)據(jù)圖作答。

在構(gòu)建含反義多聚乳糖醛酸酶基因的表達(dá)載體時(shí)，若用Sma I與Pst I完全酶切含目的基因的DNA后，反應(yīng)管中有________種片段。為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，實(shí)際操作中，一般應(yīng)選用限制酶___________，分別同時(shí)對(duì)_____________進(jìn)行切割。

通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，可將帶有目的基因的T-DNA（重組質(zhì)粒）導(dǎo)入番茄細(xì)胞。導(dǎo)入番茄細(xì)胞的目的基因，通常插入到細(xì)胞核某一條染色體的DNA上，使目的基因的遺傳特性得以____________________。上述途徑所獲得的番茄，其后代并非每一個(gè)個(gè)體都含目的基因，原因是                    。

(3) 為了檢測(cè)番茄細(xì)胞是否導(dǎo)入了目的基因，可以采用特定的DNA分子探針進(jìn)行檢測(cè)，也可以向植物組織培養(yǎng)基中加入_______________，以篩選獲得導(dǎo)入上述重組質(zhì)粒的特定受體細(xì)胞。

向正常番茄細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入反義多聚乳糖醛酸酶基因后，發(fā)現(xiàn)多聚乳糖醛酸酶基因能正常轉(zhuǎn)錄形成mRNA，但細(xì)胞內(nèi)卻不再合成多聚乳糖醛酸酶（PG），其原因最可能是____________。