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11．大腸桿菌菌群數(shù)量是衡量食品安全的一項重要指標．下面是檢測食品中大腸菌群的常用方法：稀釋培養(yǎng)測數(shù)法（MPN）．
（一）實驗原理
（1）大腸桿菌菌群是一群能發(fā)酵乳糖、產酸產氣的無芽孢桿菌．
（2）乳糖膽鹽發(fā)酵管中溴甲酚紫的作用：用溴甲酚紫作指示劑，該指示劑中性時呈藍紫色，酸性時呈黃色．膽鹽的作用：膽鹽對很多雜菌有抑制作用，但是對大腸桿菌不造成影響．
（3）伊紅美藍能使大腸桿菌菌落呈深紫色．
（二）實驗試劑及器材（略）
（三）實驗過程
（1）檢樣稀釋
①將檢樣25mL放于有225mL滅菌生理鹽水的滅菌玻璃瓶內，經充分振搖或研磨做成1：10的均勻稀釋液．
②用1mL滅菌吸管吸取1：10稀釋液1mL，注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內，振搖試管混勻，做成1：100的稀釋液．按上述操作依次做10倍梯度稀釋液，每稀釋一次，換用1支1mL滅菌吸管．
（2）乳糖發(fā)酵試驗
根據(jù)食品衛(wèi)生標準要求或對檢樣污染情況的估計，選擇三個稀釋度，每個稀釋度，接種3管乳糖膽鹽發(fā)酵管．置于36℃溫箱內，培養(yǎng)24h，若①，則可報告為大腸菌群陰性；若②，則可報告為大腸菌群陽性．
（3）分離培養(yǎng)
將大腸菌群陽性的發(fā)酵管分別轉種在③瓊脂平板上，置36℃溫箱內，培養(yǎng)24h，然后取出，觀察④．
（4）報告
根據(jù)證實為大腸菌群陽性的管數(shù)，查MPN檢索表，報告每100mL（g）大腸菌群的MPN值．
請回答下列問題：
①請把上述空缺步驟補充完整：
①所有發(fā)酵管中溶液呈藍紫色（或都不產氣）②所有發(fā)酵管中溶液呈黃色（或有產氣者）③伊紅美藍④菌落顏色
②培養(yǎng)基中必須含有的基本成分是水、無機鹽、碳源、氮源．
③在涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)24h，這樣做的目的是檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格．
④若步驟三采用平板劃線法分離培養(yǎng)大腸桿菌，操作時，接種環(huán)應通過灼燒滅菌，在第二次及以后劃線時，總是從上一次的末端開始劃線．這樣做的目的是將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落．

10．柴油是重要的燃料油之一，也因泄露與不當排放等造成了嚴重的環(huán)境污染．科研人員從遭受柴油污染的土壤樣品中取土樣5g，加入含100mL培養(yǎng)基M的錐形瓶中，在30℃條件下震蕩培養(yǎng)5天，取出5mL培養(yǎng)液接種到相同的新鮮培養(yǎng)基，按此步驟連續(xù)培養(yǎng)5次，分離獲得醋酸鈣不動桿菌DB（一種柴油降解菌）．利用該菌，科研人員進一步探索其降解柴油的最佳條件，獲得實驗結果如圖．請回答下列問題：

（1）為獲得醋酸鈣不動桿菌DB，培養(yǎng)基M應以柴油為唯一碳源，還要考慮無機鹽的種類和比例．
（2）在實驗過程中，科研人員“30℃條件下震蕩培養(yǎng)5天，取出5mL培養(yǎng)液接種到相同的新鮮培養(yǎng)基，按此步驟，連續(xù)培養(yǎng)5次”的主要目的是使醋酸鈣不動桿菌DB的數(shù)量增加．
（3）在分裂醋酸鈣不動桿菌DB操作時，在嚴格無菌條件下，采用平板劃線法（填接種方法）在制備好的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上進行接種，接種完，對接種環(huán)進行灼燒滅菌處理．培養(yǎng)一段時間后，觀察、挑取平板上形態(tài)、顏色、大小和隆起度等一致的菌落進行重復培養(yǎng)，直到分離出單一菌株．
（4）據(jù)圖分析，若某地區(qū)土壤發(fā)生柴油重度污染時，則可以將對被柴油重度污染的土壤進行稀釋，使柴油濃度降低至4000mg．kg^-1左右，并添加濃度為6mg．g^-1的表面活性劑，以有利于提高對柴油的降解效果．

9．人工瘤胃模仿了牛羊等反芻動物的胃，可用來發(fā)酵處理秸稈，提高秸稈的營養(yǎng)價值．
為了增強發(fā)酵效果，研究人員從牛胃中篩選纖維素酶高產菌株，并對其降解纖維素能力進行了研究．請回答下列問題：
（1）在樣品稀釋和涂布平板步驟中，下列選項不需要的是③ （填序號）．
①酒精燈  ②培養(yǎng)皿  ③顯微鏡  ④無菌水
（2）在涂布平板時，滴加到培養(yǎng)基表面的菌懸液量不宜過多的原因是培養(yǎng)基表面的菌懸液會出現(xiàn)積液，導致菌體堆積，影響分離效果．
（3）向試管內分裝含瓊脂的培養(yǎng)基時，若試管口粘附有培養(yǎng)基，需要用酒精棉球擦凈的原因是避免培養(yǎng)基污染棉塞．
（4）剛果紅可以與纖維素形成紅色復合物，但并不與纖維素降解產物纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應．研究人員在剛果紅培養(yǎng)基平板上，篩到了幾株有透明降解圈的菌落（見圖1）． 圖中降解圈大小與纖維素酶的量與活性 有關． 圖中降解纖維素能力最強的菌株是①（填圖中序號）．

（5）研究人員用篩選到的纖維素酶高產菌株J1和J4，在不同溫度和pH條件下進行發(fā)酵，測得發(fā)酵液中酶活性的結果見圖2，推測菌株J4 更適合用于人工瘤胃發(fā)酵，理由是發(fā)酵過程會產熱和產酸，J4菌株在較高溫度和酸性環(huán)境下酶的活性更高．

8．生物技術與社會現(xiàn)象、生產實際聯(lián)系密切，請回答下列關于生物技術實踐的問題．
（1）在果酒果醋的自然發(fā)酵過程中，酵母菌的來源是附著在果皮上的野生型酵母菌，發(fā)酵裝置內加入果汁后要留出約$\frac{1}{3}$的空間，目的是有利于酵母菌有氧呼吸并進行快速繁殖；防止發(fā)酵過程中產生二氧化碳造成發(fā)酵液溢出．酒精發(fā)酵后轉入醋酸發(fā)酵前，除改變溫度外，還需調整的發(fā)酵條件是通入無菌空氣．
（2）普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人將地衣芽孢桿菌的α-淀粉酶基因轉入酵母菌中，經篩選得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌種：

圖一中的②、③過程需重復幾次，目的是進一步篩選純化獲得分解淀粉能力強的酵母菌．某同學嘗試過程③的操作，其中一個平板經培養(yǎng)后的菌落分布如圖二所示，推測該同學接種時可能的操作失誤是涂布不均勻．
（3）制備固定化酵母細胞時要將干酵母活化，并將溶化好的海藻酸鈉溶液冷卻至室溫，加入已活化的酵母細胞，進行充分攪拌，使其混合均勻，再轉移至注射器中，以恒定的速度緩慢地將注射器中的溶液滴加到配制好的氯化鈣溶液中，觀察凝膠珠的形成．
（4）DNA粗提取與鑒定實驗中，對最后得到絮狀物進行鑒定時，先取兩支試管，分別加入等量的2mol/L的NaCl溶液，其中向一支試管加入絮狀物，再向兩試管中各加入4mL二苯胺試劑，混合均勻，后續(xù)進一步的操作是將試管置于沸水中加入5分鐘（等冷卻后），比較兩支試管中溶液的顏色．

7．荷斯坦牛以產奶量高而聞名于世，如果利用生物工程技術培育優(yōu)良荷斯坦牛．請回答：
（1）利用促性腺激素處理適齡奶牛，使其超數(shù)排卵，采集的卵母細胞培育到減數(shù)第二次分裂中期，在顯微鏡下可以觀察到次級卵母細胞和第一極體．
（2）在體外受精前一般要對精子進行處理，目的是使其獲能．
（3）為了得到同卵多胎，在胚胎發(fā)育到桑椹胚或囊胚時，進行胚胎分割，在這個過程中，要將內細胞團   均等分割，否則會影響分割后胚胎的恢復和發(fā)育．
（4）在奶牛出生前要確定荷斯坦牛的性別，可以利用少量胚胎細胞進行性別鑒定，該技術采用的方法是用基因探針進行DNA雜交．
（5）荷斯坦牛的胚胎干細胞可從早期胚胎或原始性腺中分離獲�。�

6．如圖表示用于預防和治療禽流感的單克隆抗體生產過程，請回答下列問題：

（1）若A細胞是小鼠的骨髓瘤細胞，則B細胞取自感染禽流感病毒的動物或人　體內的B淋巴細胞，促進d過程的誘導劑是聚乙二醇或滅活的病毒．
（2）假設僅考慮兩個細胞的融合，則可形成3種類型的C細胞，因此需用選擇性培養(yǎng)基篩選出具有既能無限增殖又能產生特異性抗體特點的D細胞用于培養(yǎng)．D細胞的名稱是雜交瘤細胞．
（3）在細胞培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基中除需要加入糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽和微量元素外，通常還需加入血清、血漿等一些天然成分．
（4）目前注射禽流感疫苗是預防禽流感的一種措施．決定禽流感病毒在人體細胞中增殖變化的物質是禽流感病毒的RNA．

5．下列有關生物技術實踐的敘述，正確的是（　�。�

	A．	在制備果酒、果醋和腐乳的過程中都要持續(xù)通入氧氣
	B．	用二苯胺試劑鑒定DNA時需設置對照實驗
	C．	加酶洗衣粉中的酶制劑都能直接去除衣物上的污垢
	D．	固定化細胞和固定化酶都需要一定的營養(yǎng)條件

4．生態(tài)農業(yè)不僅指對于農作物中所含物質、能量的充分利用，還包括很多的內涵．人們越來越認識到根據(jù)不同地區(qū)的土地、光、水等各種自然資源，設計出適合本地的生態(tài)農業(yè)結構的重要意義．下列措施中不符合生態(tài)學原理的是（　　）

	A．	作物“輪種”不僅合理地利用各種礦質營養(yǎng)，還可避免某些蟲害的大發(fā)生
	B．	以作物秸稈為燃料發(fā)電，可以做到對農作物中物質和能量的多級利用
	C．	充分利用各種生物固氮措施，盡量施用農家肥，減少化肥的施用
	D．	應用以蟲治蟲、以菌治蟲

3．下列有關哺乳動物胚胎發(fā)育和胚胎工程的敘述，不正確的是（　�。�

	A．	移植用的胚胎一般取桑椹胚或囊胚
	B．	滋養(yǎng)層細胞發(fā)育成胎膜和胎盤
	C．	分割囊胚階段的內細胞團要求均等
	D．	卵裂期胚胎中細胞數(shù)目和有機物總量在不斷增加

2．根據(jù)所學生物學知識回答下列問題：
（1）蛋白質工程是通過基因修飾或基因合成，對現(xiàn)有蛋白質進行改造，或制造一種新的蛋白質．
（2）擴增目的基因的過程可以在PCR儀中自動完成，目前治療遺傳病最有效的手段是基因治療．
（3）運用基因工程技術已經創(chuàng)造出了“蜘蛛羊”，該羊的乳汁中含有蛛絲蛋白．為保證實驗成功，產生蛛絲蛋白的基因需從部分基因文庫（保存著大量反轉錄產生的DNA片段）中獲取，并與乳腺蛋白基因的啟動子等調控組件重組在一起，然后與載體結合構成基因表達載體．
（4）哺乳動物卵子的形成和在卵巢內的儲備，是在出生前完成的，這是精子和卵子在發(fā)生上的重要區(qū)別．
（5）生態(tài)系統(tǒng)內即使某個物種由于某種原因而死亡，也會很快有其他物種占據(jù)它原來的生態(tài)位置，從而避免系統(tǒng)結構或功能失衡．這主要體現(xiàn)了生態(tài)工程的什么原理B
A．協(xié)調與平衡原理    B．物種多樣性原理
C．物質循環(huán)再生原理   D．整體性原理．