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14．表中列出了幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖l、圖2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)．請(qǐng)回答下列問題：

限制酶	BamHⅠ	HindⅢ	EcoRⅠ	SmaⅠ
識(shí)別序列及切割位點(diǎn)	G↓GATCC CCTAG↑G	A↓AGCTT TTCGA↑A	G↓AATTC CTTAA↑G	CCC↓GGG GGG↑CCC

（1）一個(gè)圖1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)SmaⅠ切割前后，分別含有0、2    個(gè)游離的磷酸基團(tuán)．
（2）若對(duì)圖中質(zhì)粒進(jìn)行改造，插入的SmaⅠ酶切位點(diǎn)越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越高．
（3）用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用SrnaⅠ切割，原因是SmaⅠ會(huì)破壞質(zhì)粒的抗性基因．外源DNA中的目的基因．
（4）與只使用EcoR I相比較，使用BamHⅠ和HindⅢ兩種限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒、外源DNA的優(yōu)點(diǎn)在于可以防止質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化．
（5）為了獲取重組質(zhì)粒，將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合，并加入DNA連接 酶．
（6）重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了鑒別和篩選含有目的基因的細(xì)胞．

13．能識(shí)別特定的DNA序列并進(jìn)行剪切，不同的限制酶可以對(duì)不同的核酸序列進(jìn)行剪切．現(xiàn)用E、H、P三種不同的限制酶對(duì)一段大小6.2kb的線狀DNA進(jìn)行剪切后，用凝膠電泳分離各核酸片段，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖所示，這3種不同的限制酶在此DNA片段上相應(yīng)切點(diǎn)的位置是（　　）

E	H	P	E+H	E+P	H+P

	A．			B．
	C．			D．

12．莠去津是一種含氮農(nóng)藥（化學(xué)名稱：2-氯-4-二乙胺基-6-異丙胺基-1，3，5-三嗪），在土壤中不易降解，為修復(fù)被其污染的土壤，可按下面程序選育能降解莠去津的細(xì)菌（目的菌）．請(qǐng)據(jù)圖回答：（已知莠去津在水中溶解度低，含過(guò)量莠去津的固體培養(yǎng)基不透明）

（1）由圖推斷，從A瓶到C瓶液體培養(yǎng)的過(guò)程稱為選擇培養(yǎng)，目的是初步選擇能降解莠去津的細(xì)菌（目的菌）并增加其數(shù)量．
（2）在將C瓶菌種接種到固體培養(yǎng)基之前通常要進(jìn)行梯度稀釋，從圖中看本實(shí)驗(yàn)將菌種接種到固體培養(yǎng)基的方法是稀釋涂布平板法．
（3）一段時(shí)間后，培養(yǎng)基出現(xiàn)無(wú)透明圈和有透明圈兩種菌落，我們篩選的目的菌是有透明圈菌落中的細(xì)菌，該菌落生長(zhǎng)所需的氮元素主要來(lái)源于莠去津．
（4）為弄清固體培養(yǎng)基中的非目的菌的菌落來(lái)自C瓶菌種還是培養(yǎng)基，應(yīng)如何設(shè)置對(duì)照組？配制的培養(yǎng)基滅菌后不接種菌種，與實(shí)驗(yàn)組放在相同條件下培養(yǎng)．
（5）某同學(xué)計(jì)劃統(tǒng)計(jì)C瓶中“目的菌”的總數(shù)，他選用10^-4稀釋液進(jìn)行涂布分離，且設(shè)置了3個(gè)培養(yǎng)皿的實(shí)驗(yàn)組．該同學(xué)得到的3個(gè)平板的菌落數(shù)分別是21、212和256，該同學(xué)以這3個(gè)平板上菌落平均數(shù)作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果．你認(rèn)為合理嗎？不合理．如何解釋3個(gè)平板上的數(shù)據(jù)差異？可能在操作過(guò)程中出現(xiàn)了錯(cuò)誤如某一組實(shí)驗(yàn)取菌液太少或涂布不均勻或涂布器未冷卻充分殺死了細(xì)菌（其他合理答案可給分）．
（6）實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，除了菌種保存外，使用過(guò)的培養(yǎng)基及培養(yǎng)物必須經(jīng)過(guò)滅菌處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散．

11．多環(huán)芳烴是具有致癌、致畸、致突變作用的全球性污染物，是煤、石油、有機(jī)高分子化合物等有機(jī)物不完全燃燒時(shí)產(chǎn)生的揮發(fā)性碳?xì)浠�合物，包括萘、蒽、菲、芘�?50余種化合物．某研究小組從一污水處理廠的污泥中篩選到一株可降解萘、蒽的細(xì)菌，命名為BDP01．
（1）該研究小組所用的培養(yǎng)基應(yīng)以萘或蒽作為唯一碳源，其目的是篩選出BDP01菌株，從功能看該培養(yǎng)基類型屬于選擇培養(yǎng)基．
（2）接種時(shí)所用的接種環(huán)通過(guò)灼燒滅菌，在第二次及其后的劃線操作時(shí)，總是從上一次劃線的末端開始劃線，該分離純化方法稱平板劃線法．
（3）下面的圖1和圖2為該研究小組進(jìn)行的其中兩個(gè)實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖，菌株的生長(zhǎng)量以分光光度計(jì)于600nm處測(cè)定的光吸收值（OD₆₀₀）表示．

①測(cè)定菌株生長(zhǎng)量時(shí)用液體培養(yǎng)基，并需振蕩培養(yǎng)．振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快．分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中溶氧量的含量，同時(shí)可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率．
②由圖1可見，菌株生長(zhǎng)量較高的溫度范圍是30～35℃．圖2結(jié)果表明，BDP01對(duì)pH的適應(yīng)范圍較小，在酸性條件下的生長(zhǎng)量要小于堿性條件下的．
③結(jié)合圖2推測(cè)，進(jìn)行圖1相關(guān)實(shí)驗(yàn)時(shí)培養(yǎng)基的pH最可能為7.0（用圖2中相關(guān)數(shù)值表示）．
（4）通常，對(duì)獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的鑒定（或分類）．

10．某些微生物能合成纖維素酶，通過(guò)對(duì)這些微生物的研究，人們能夠利用秸稈等廢棄物生產(chǎn)酒精，用纖維素酶處理服裝面料等．研究人員用化合物A、硝酸鹽、磷酸鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基，成功地篩選到能產(chǎn)生纖維素酶的微生物．請(qǐng)分析并回答問題：
（1）培養(yǎng)基中加入的化合物A是纖維素，為微生物的生長(zhǎng)提供碳源，這種培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基．
（2）在篩選纖維素分解菌的過(guò)程中，通常用剛果紅染色法，這種方法能夠通過(guò)顏色反應(yīng)直接對(duì)纖維素分解菌進(jìn)行篩選．甲同學(xué)在實(shí)驗(yàn)時(shí)得到了如上圖所示的結(jié)果，則纖維素分解菌位于A內(nèi)．
A．③B．①②C．②③D．①②③
（3）某同學(xué)打算從牛胃中分離纖維素分解菌并計(jì)數(shù)，與分離醋酸菌相比，進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)除了營(yíng)養(yǎng)不同外，最主要的實(shí)驗(yàn)條件差別是保證無(wú)氧環(huán)境，該同學(xué)采用活菌計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)目往往比活菌的實(shí)際數(shù)目小（低）．
（4）纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般包括三種成分：C₁酶、C_X酶和葡萄糖苷酶．前兩種酶能使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖．
（5）某同學(xué)在提取和分離纖維素酶的過(guò)程中，為了保證抵制外界酸和堿對(duì)酶活性的影響，采取的措施是向提取液和分離液中添加緩沖溶液；若探究纖維素酶活性的最適溫度，如何設(shè)置對(duì)照？設(shè)置不同的溫度梯度進(jìn)行相互對(duì)照．
（6）無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染，還能有效避免操作者被微生物感染．

9．近年來(lái)，紀(jì)錄片《舌尖上的中國(guó)》引發(fā)全民關(guān)注美食的熱潮，其中多次講述了利用不同微生物的發(fā)酵作用制作的美味食品．請(qǐng)分析回答下列問題：
（1）在果醋制作時(shí)，運(yùn)用醋酸菌在供應(yīng)氧氣和糖源充足時(shí)，將糖分解成醋酸；在糖源不充足時(shí)，也可以利用酒精生成醋酸，請(qǐng)寫出該過(guò)程的化學(xué)反應(yīng)式：C₂H₅OH+O₂$\stackrel{酶}{→}$CH₃COOH+H₂O+能量．
（2）腐乳制作的流程是：讓豆腐上長(zhǎng)出毛霉→加鹽腌制→加鹵湯裝瓶→密封腌制．用鹽腌制時(shí)，應(yīng)注意控制鹽的用量；配制鹵湯時(shí)，要使鹵湯中酒的含量控制在12%左右．
（3）制作泡菜的原理是乳酸菌在無(wú)氧的環(huán)境下大量繁殖，將葡萄糖分解成乳酸．
（4）蔬菜在腌制過(guò)程中，會(huì)產(chǎn)生亞硝酸鹽．在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料．
（5）從開始制作到泡菜質(zhì)量最佳這段時(shí)間內(nèi)，泡菜液逐漸變酸，這段時(shí)間內(nèi)泡菜壇中乳酸菌和其他雜菌的消長(zhǎng)規(guī)律是乳酸菌數(shù)量增多，雜菌數(shù)量減少，原因是乳酸菌比雜菌更耐酸．

8．蘋果醋具有營(yíng)養(yǎng)豐富，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，護(hù)膚養(yǎng)肝等多種功效，以鮮蘋果汁為原料利用發(fā)酵瓶制作果酒和果醋的過(guò)程簡(jiǎn)圖如圖1，請(qǐng)分析回答：

（1）過(guò)程甲中使用的微生物是酵母菌，蘋果酒制作過(guò)程中，接種完成后要先向發(fā)酵罐中通入一段時(shí)間的無(wú)菌空氣，目的是在有氧條件下，使酵母菌迅速繁殖，增加數(shù)量．發(fā)酵溫度控制在18℃～25℃，經(jīng)過(guò)10～12天后，樣液中是否產(chǎn)生酒精，可以用（酸性）重鉻酸鉀溶液來(lái)檢驗(yàn)．
（2）與醋酸桿菌相比，酵母菌在結(jié)構(gòu)上的主要特點(diǎn)是有成形的細(xì)胞核．
（3）某同學(xué)嘗試自己利用圖2裝置制果醋，制作過(guò)程中充氣口應(yīng)充入空氣，排氣口要通過(guò)一個(gè)長(zhǎng)而彎曲的膠管與瓶身相連，這樣做的原因是防止空氣中微生物的污染．
（4）若將菌種進(jìn)行臨時(shí)保存時(shí)，可在低溫下使用試管斜面保存，但該方法除保存時(shí)間短外，菌種還易被污染或產(chǎn)生變異；若需較長(zhǎng)時(shí)間保存菌種，可用的方法是甘油管藏．

7．下列關(guān)于微生物分離和培養(yǎng)的有關(guān)敘述，不正確的是（　�。�

	A．	分離土壤中不同的微生物，要采用不同的稀釋度
	B．	測(cè)定土壤樣品中的活菌數(shù)目，常用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法
	C．	分離能分解尿素的細(xì)菌，要以尿素作為培養(yǎng)基中唯一氮源
	D．	對(duì)照實(shí)驗(yàn)是指除了被測(cè)試條件以外，其他條件都相同的實(shí)驗(yàn)

6．下列與傳統(tǒng)發(fā)酵有關(guān)的微生物的比較中，不正確的是（　�。�

	A	B	C	D
微生物	酵母菌	醋酸菌	毛霉	乳酸菌
生物學(xué)分類	真核生物	原核生物	真核生物	原核生物
代謝類型	異養(yǎng)兼性厭氧型	異養(yǎng)需氧型	異養(yǎng)需氧型	異養(yǎng)厭氧型
適宜溫度	18～25℃	30～35℃	15～18℃	室溫
主要用途	釀酒、發(fā)面	釀醋、酸奶	制作腐乳	制作泡菜

A．

A

B．

B

C．

C

D．

D

5．在做土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要在酒精燈火焰旁操作的有（　�。�
①土壤取樣 ②稱取土壤 ③稀釋土壤溶液 ④涂布平板 ⑤微生物的培養(yǎng)．

A．

①②④

B．

①④⑤

C．

②③⑤

D．

②③④