Question

糧食問題一直困擾著人類。為擴大可耕地面積，增加糧食產(chǎn)量，沿海灘涂鹽堿地的開發(fā)利用備受關注。我國科學家應用耐鹽堿基因培育出了耐鹽堿水稻新品系。請據(jù)圖回答下列問題：

圖1 轉基因操作流程圖

表2 幾種限制酶識別序列及切割位點表
（1）如果要將耐鹽堿基因和質(zhì)粒重組，必須對基因進行修飾和改造：在基因兩側的A和B位置分別加入____________限制酶識別序列，這樣才有利于目的基因和質(zhì)粒定向連接。
（2）過程②采用PCR技術擴增目的基因時，在PCR反應體系需加入引物Ⅰ和引物Ⅱ等物質(zhì)，若共用了引物Ⅱ31個，則目的基因擴增了_______代。
（3）若用EcoRⅠ和PstⅠ兩種限制酶同時切割載體質(zhì)粒，則能形成_______種不同長度的DNA片段，共有________個游離的磷酸基團。
（4)圖示中將基因表達載體構建完成后沒有直接導入農(nóng)桿菌，而是先將其導入大腸桿菌，目的是____________________。
（5）在步驟⑤⑥過程中都需用________________處理兩類細菌。為了確認目的基因通過⑦過程導入植物細胞中后是否成功表達，通常從分子水平進行檢測的方法是用___________法。

Answer 1

（1）EcoRⅠ、SmaⅠ        （2）5
（3）2   4   （4）獲取大量重組質(zhì)粒（讓目的基因擴增）
（5）Ca^2＋　抗原—抗體雜交

解析試題分析：
（1）要想讓目的基因和質(zhì)粒定向連接，目的基因兩端的切點最好不同，分析圖1中質(zhì)粒的酶切位點，題干中已經(jīng)使用了限制酶EcoRⅠ，如果再用限制酶PstⅠ進行切割，切下的質(zhì)粒片段比較長，可能會影響質(zhì)粒的功能，因此最好使用SmaⅠ，同理對目的基因兩側用EcoRⅠ、SmaⅠ限制酶進行切割，可以保證定向連接，比較重組DNA分子和質(zhì)�？芍�，A端用限制酶EcoRⅠ，B端使用限制酶SmaⅠ。
（2）根據(jù)PCR技術擴增的過程可以推知，消耗引物Ⅱ31個，說明共生成了32個DNA分子，32=2⁵，因此一共擴增了5代。
（3）分析圖1可知，若用EcoRⅠ和PstⅠ同時切割載體質(zhì)粒，則能形成2種DNA片段，由于每個DNA鏈的一端有1個游離的磷酸基團，故一個DNA片段有2個游離的磷酸基團，共4個游離的磷酸基團。
（4）將基因表達載體導入大腸桿菌便于培養(yǎng)，讓目的基因大量擴增。
（5）將目的基因導入微生物細胞中都要用到Ca^2＋處理法，使微生物細胞成為感受態(tài)細胞；為了確認目的基因是否成功表達，從分子水平上進行檢測，即檢測表達產(chǎn)物蛋白質(zhì)，要用到抗原-抗體雜交法。
考點：本題考查基因工程的有關知識，意在考查考生識圖能力和理解所學知識的要點，把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系的能力；能從課外材料中獲取相關的生物學信息，并能運用這些信息，結合所學知識解決相關的生物學問題。