Question

19．土壤中有些細(xì)菌含有脲酶，可通過降解尿素作為其生長(zhǎng)的氮源．現(xiàn)對(duì)土壤中的這類細(xì)菌進(jìn)行分離實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)回答：
（1）分離培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)必須進(jìn)行無菌操作，包括培養(yǎng)基和各種器皿都必須是無菌的，常用的滅菌方法有高壓蒸氣滅菌、灼燒滅菌（或干熱滅菌）（至少答2種）．
（2）可用涂布分離或劃線分離法分離純化得到能降解尿素的菌種．在接種活菌的過程中，要在酒精燈旁進(jìn)行操作，接種后的培養(yǎng)皿倒置于37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)．
（3）用含有酚紅指示劑的培養(yǎng)基篩選能分泌脲酶的細(xì)菌，若培養(yǎng)基中存在分解尿素的細(xì)菌，其菌落周圍會(huì)出現(xiàn)紅色環(huán)帶，這是由于尿素被分解產(chǎn)生的氨使pH升高，使酚紅指示劑產(chǎn)生顏色變化，從而證明這一菌株以尿素為氮源．變色區(qū)域越大，表明該菌株利用尿素的能力越強(qiáng)．

Answer 1

分析 實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有灼燒滅菌（如接種環(huán)）、干熱滅菌（如培養(yǎng)皿）、高壓蒸汽滅菌（如培養(yǎng)基）等．
無菌操作要求在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中操作都在酒精燈火焰附近進(jìn)行，以避免周圍微生物的污染．
微生物接種的方法很多，最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法．稀釋涂布平板法則是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)．

解答 解：（1）用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種工具和培養(yǎng)基等都必須是無菌的，常用的滅菌方法有高壓蒸汽滅菌、灼燒滅菌和干熱滅菌．
（2）可用平板劃線法或稀釋涂布平板法分離純化得到能降解尿素的菌種．為避免雜菌污染，操作要在酒精燈火焰旁操作，為防止水蒸氣在皿蓋上凝結(jié)會(huì)產(chǎn)生水滴，培養(yǎng)皿需要倒置在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)．
（3）酚紅指示劑可用于鑒別微生物，所以含有酚紅指示劑的培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基；尿素被分解成氨可使PH呈堿性，變色區(qū)域越大，說明其分解能力越強(qiáng)．
故答案為：
（1）高壓蒸氣滅菌、灼燒滅菌（或干熱滅菌）     
（2）涂布分離 或劃線分離    酒精燈    倒置    恒溫培養(yǎng)箱       
（3）氨          越強(qiáng)

點(diǎn)評(píng) 本題以脲酶為素材，考查微生物的分離和培養(yǎng)、以氮素為氮源測(cè)定能生長(zhǎng)的細(xì)菌的數(shù)量，要求考生識(shí)記無菌技術(shù)，特別是實(shí)驗(yàn)室常用的消毒和滅菌方法；掌握培養(yǎng)基的種類，能應(yīng)用相應(yīng)的培養(yǎng)基對(duì)土壤中的含有脲酶的細(xì)菌進(jìn)行分離．