Question

為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體膜上的轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因相連，導(dǎo)人油菜細(xì)胞并獲得了轉(zhuǎn)基因油菜品種．
（1）研究人員依據(jù)基因的已知序列設(shè)計(jì)引物，采用

 

法從陸地棉基因文庫(kù)中獲取酶D基因．從擬南芥基因文庫(kù)中獲取轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因．所含三種限制酶（ClaⅠ、SacⅠ、XbaⅠ）的切點(diǎn)如圖所示．則用

 

和

 

酶處理兩個(gè)基因后，可得到

 

 （填圖中字母）端相連的融合基因．

（2）將上述融合基因插入如圖所示質(zhì)粒的T-DNA中．構(gòu)建

 

并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中．將獲得的農(nóng)桿菌接種在含

 

的固體平板上培養(yǎng)得到含融合基因的單菌落，再利用

 

培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的浸染液．
（3）剪取油菜的葉片放入染液中一段時(shí)間，此過(guò)程的目的是

 

．進(jìn)一步篩選后獲得轉(zhuǎn)獲因油菜細(xì)胞．該細(xì)胞通過(guò)

 

技術(shù)．可培育成轉(zhuǎn)基因油菜植株．
（4）提取上述轉(zhuǎn)基因油菜的mRNA．在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下獲得cDNA．再依據(jù)

 

的DNA片段設(shè)計(jì)引物進(jìn)行擴(kuò)增．對(duì)擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行檢側(cè)．可判斷融合是否完成

 

．
（5）用

 

法可檢測(cè)轉(zhuǎn)基因油菜植株中的融合基因是否成功表達(dá)．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：基因文庫(kù)包括cDNA文庫(kù)、基因組文庫(kù)等．某個(gè)群體包含一種生物所有的基因的文庫(kù)叫基因組文庫(kù)，而用某種生物發(fā)育的某個(gè)時(shí)期的mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的多種互補(bǔ)DNA片段屬于cDNA文庫(kù)

解答： 解：（1）研究人員依據(jù)基因的已知序列設(shè)計(jì)引物，采用PCR法從陸地棉基因文庫(kù)中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫(kù)中獲取轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因．在上述引物設(shè)計(jì)時(shí)，分別在引物中加入如圖甲所示酶的識(shí)別序列，這樣可以用ClaⅠ限制酶和DNA連接酶處理兩個(gè)基因后，得到A、D端相連的融合基因．
（2）將上述融合基因插入圖乙所示Ti質(zhì)粒的T-DNA中，構(gòu)建表達(dá)載體即重組質(zhì)粒并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中．將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的浸染液．
（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時(shí)間，此過(guò)程的目的是利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜�?xì)胞，進(jìn)一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜細(xì)胞．該細(xì)胞通過(guò)植物組織培養(yǎng)技術(shù)，可培育成轉(zhuǎn)基因油菜植株．
（4）提取上述轉(zhuǎn)基因油菜的mRNA，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下獲得cDNA，再依據(jù)融合基因的DNA片段設(shè)計(jì)引物進(jìn)行擴(kuò)增，對(duì)擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行檢測(cè)，可判斷融合基因是否完成轉(zhuǎn)錄．
（5）用抗原-抗體雜交法可檢測(cè)轉(zhuǎn)基因油菜植株中的融合基因是否成功表達(dá)．
故答案為：
（1）PCR    ClaⅠDNA連接    A、D  
（2）基因表達(dá)載體（或重組質(zhì)粒）    四環(huán)素       液體
（3）利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜�?xì)胞   植物組織培養(yǎng)
（4）融合基因      轉(zhuǎn)錄 
（5）抗原-抗體雜交

點(diǎn)評(píng)：本題以增加油菜種子的含油量為材料背景，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生的識(shí)圖能力和判斷能力，運(yùn)用所學(xué)知識(shí)綜合分析問(wèn)題和解決問(wèn)題的能力．