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綠色熒光蛋白(GFP)是由GFP基因表達的一種能在紫外線照射下發(fā)出綠色熒光的蛋白質(zhì)，它首先在水母中發(fā)現(xiàn)。如圖為培育綠色熒光蛋白轉(zhuǎn)基因豬的流程圖，此豬的獲得，運用了哪些技術(shù)

①轉(zhuǎn)基因技術(shù)②核移植技術(shù)③早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)④胚胎移植技術(shù)等⑤顯微注射技術(shù)⑥胚胎分割技術(shù)

A．①②③④⑥   B．①②④⑤⑥   C．①②③④⑤   D．①②③④⑤⑥

綠色熒光蛋白基因（GFP）被發(fā)現(xiàn)以來，一直作為一個監(jiān)測完整細胞和鲴織內(nèi)基因表達及蛋白質(zhì)位置的理想標記。請根據(jù)圖表回答下列問題。

（1）若圖中GFP的M端伸出的核苷酸的堿基序列是—TCGA—，N端伸出的核苷酸的堿基序列是—TGCA—，則在構(gòu)建含該GFP的重組質(zhì)粒A時，應選用的限制酶是__________。③過程需要的酶是__________。

（2）④過程將基因表達載體導入豬胎兒成纖維細胞常用的方法是__________。

（3）檢測GFP是否已重組到豬胎兒成纖維細胞的染色體DNA上，可采用__________技術(shù)進行檢測。

（4）用顯微鏡可觀察到用于⑥過程的豬卵母細胞的卵黃膜和透明帶之間有__________個極體。用于⑤過程的豬胎兒成纖維細胞，一般選用傳代10代以內(nèi)的細胞，原因是__________。

（5）由⑦過程獲得的重組細胞培育成綠色熒光轉(zhuǎn)基因克隆豬，涉及到的現(xiàn)代生物技術(shù)手段有__________。

（6）為了加快繁殖速度，可采用胚胎分割的方法。若對⑧過程得到的囊胚階段胚胎進行分割，要注意__________。得到綠色熒光轉(zhuǎn)基因克隆豬（雌性）之后，可用__________處理，使之超數(shù)排卵，提高其繁育能力。

       綠色熒光蛋白基因（GFP）被發(fā)現(xiàn)以來，一直作為一個監(jiān)測完整細胞和鲴織內(nèi)基因表達及蛋白質(zhì)位置的理想標記。請根據(jù)圖表回答下列問題。

（1）若圖中GFP的M端伸出的核苷酸的堿基序列是—TCGA—，N端伸出的核苷酸的堿基序列是—TGCA—，則在構(gòu)建含該GFP的重組質(zhì)粒A時，應選用的限制酶足③過程需要的酶是____．

（2）④過程將基因表達載體導入豬胎兒成纖維細胞常用的方法是           。

（3）檢測GFP是否已重組到豬胎兒成纖維細胞的染色體DNA上，可采用       技術(shù)進行檢測。

（4）圖中豬的卵母細胞應處于________期，此時在顯微鏡下可觀察到在卵黃膜和透明帶之間有

           個極體。用于核移植的導入了基因表達載體的豬胎兒成纖維細胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細胞的原因是____           。

（5）由重組細胞培育得到綠色熒光轉(zhuǎn)基因克隆豬過程中涉及到的現(xiàn)代生物技術(shù)手段有      ，生殖方式為____              。

（6）假如該過程得到了一個早期胚胎，為了加快繁殖速度，可采用胚胎分割的方法，分割時應選擇_        ___或囊胚。對囊胚階段的胚胎進行分割時，要注意               。得到綠色熒光轉(zhuǎn)基因克隆豬（雌性）之后，可用                   處理，使之超數(shù)排卵，提高其繁育能力。

綠色熒光蛋白基因（GFP）被發(fā)現(xiàn)以來，一直作為一個監(jiān)測完整細胞和鲴織內(nèi)基因表達及蛋白質(zhì)位置的理想標記。請根據(jù)圖表回答下列問題。

（1）若圖中GFP的M端伸出的核苷酸的堿基序列是—TCGA—，N端伸出的核苷酸的堿基序列是—TGCA—，則在構(gòu)建含該GFP的重組質(zhì)粒A時，應選用的限制酶是__________。③過程需要的酶是__________。
（2）④過程將基因表達載體導入豬胎兒成纖維細胞常用的方法是__________。
（3）檢測GFP是否已重組到豬胎兒成纖維細胞的染色體DNA上，可采用__________技術(shù)進行檢測。
（4）用顯微鏡可觀察到用于⑥過程的豬卵母細胞的卵黃膜和透明帶之間有__________個極體。用于⑤過程的豬胎兒成纖維細胞，一般選用傳代10代以內(nèi)的細胞，原因是__________。
（5）由⑦過程獲得的重組細胞培育成綠色熒光轉(zhuǎn)基因克隆豬，涉及到的現(xiàn)代生物技術(shù)手段有__________。
（6）為了加快繁殖速度，可采用胚胎分割的方法。若對⑧過程得到的囊胚階段胚胎進行分割，要注意__________。得到綠色熒光轉(zhuǎn)基因克隆豬（雌性）之后，可用__________處理，使之超數(shù)排卵，提高其繁育能力。

綠色熒光是由綠色熒光蛋白發(fā)出的，為培育能發(fā)出綠色熒光的小鼠，人們設計了如下的流程：

據(jù)圖回答下列問題：

（1）綠色熒光基因通�？梢詮幕�因文庫中獲取，含有一種生物所有基因的文庫稱為___  _____________。

（2）A過程是基因工程的核心，常用到的工具酶有限制性核酸內(nèi)切酶和          ，它們作用的化學鍵是___    ____。一個基因表達載體的組成，除了目的基因和復制原點外，還必需有      ___  、            以及標記基因。

（3）B過程常用的方法是____________，進行D過程前，利用____________技術(shù)可以獲得數(shù)目更多且基因型完全相同的綠色熒光小鼠。

（4）也有人設想培育能發(fā)光的樹，白天做行道樹，夜晚做路燈照明�？蓪�熒光蛋白基因?qū)�入植物的體細胞中，再利用_______________________技術(shù)最終培育成植物體。

（5）在特制的熒光體視顯微鏡下可以看到，熒光小鼠的皮膚、腦部、肺部發(fā)出綠色熒光，可觀察胚胎干細胞在體內(nèi)發(fā)育的走向。例如，科研人員將神經(jīng)干細胞植入小鼠體內(nèi)治療帕金森，以前沒有熒光鼠的時候，很難分辨打入小鼠體內(nèi)的神經(jīng)干細胞與小鼠自身的細胞的不同。現(xiàn)在要研究打入小鼠體內(nèi)的神經(jīng)干細胞的走向，簡要寫出操作思路：       ______。

[生物一一一選修3：現(xiàn)代生物科技專題]（15分）
綠色熒光蛋白基因（GFP）被發(fā)現(xiàn)以來，一直作為一個監(jiān)測完整細胞和鲴織內(nèi)基因表達及蛋白質(zhì)位置的理想標記。請根據(jù)圖表回答下列問題。

（1）若圖中GFP的M端伸出的核苷酸的堿基序列是—TCGA—，N端伸出的核苷酸的堿基序列是—TGCA—，則在構(gòu)建含該GFP的重組質(zhì)粒A時，應選用的限制酶足③過程需要的酶是____．
（2）④過程將基因表達載體導入豬胎兒成纖維細胞常用的方法是__________。
（3）檢測GFP是否已重組到豬胎兒成纖維細胞的染色體DNA上，可采用__________技術(shù)進行檢測。
（4）圖中豬的卵母細胞應處于________期，此時在顯微鏡下可觀察到在卵黃膜和透明帶之間有__________個極體。用于核移植的導入了基因表達載體的豬胎兒成纖維細胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細胞的原因是__________。
（5）由重組細胞培育得到綠色熒光轉(zhuǎn)基因克隆豬過程中涉及到的現(xiàn)代生物技術(shù)手段有__________，生殖方式為__________。
（6）假如該過程得到了一個早期胚胎，為了加快繁殖速度，可采用胚胎分割的方法，分割時應選擇__________或囊胚。對囊胚階段的胚胎進行分割時，要注意__________。得到綠色熒光轉(zhuǎn)基因克隆豬（雌性）之后，可用__________處理，使之超數(shù)排卵，提高其繁育能力。

[生物一一一選修3：現(xiàn)代生物科技專題]（15分）

綠色熒光蛋白基因（GFP）被發(fā)現(xiàn)以來，一直作為一個監(jiān)測完整細胞和鲴織內(nèi)基因表達及蛋白質(zhì)位置的理想標記。請根據(jù)圖表回答下列問題。

（1）若圖中GFP的M端伸出的核苷酸的堿基序列是—TCGA—，N端伸出的核苷酸的堿基序列是—TGCA—，則在構(gòu)建含該GFP的重組質(zhì)粒A時，應選用的限制酶足③過程需要的酶是____．

（2）④過程將基因表達載體導入豬胎兒成纖維細胞常用的方法是__________。

（3）檢測GFP是否已重組到豬胎兒成纖維細胞的染色體DNA上，可采用__________技術(shù)進行檢測。

（4）圖中豬的卵母細胞應處于________期，此時在顯微鏡下可觀察到在卵黃膜和透明帶之間有__________個極體。用于核移植的導入了基因表達載體的豬胎兒成纖維細胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細胞的原因是__________。

（5）由重組細胞培育得到綠色熒光轉(zhuǎn)基因克隆豬過程中涉及到的現(xiàn)代生物技術(shù)手段有__________，生殖方式為__________。

（6）假如該過程得到了一個早期胚胎，為了加快繁殖速度，可采用胚胎分割的方法，分割時應選擇__________或囊胚。對囊胚階段的胚胎進行分割時，要注意__________。得到綠色熒光轉(zhuǎn)基因克隆豬（雌性）之后，可用__________處理，使之超數(shù)排卵，提高其繁育能力。

2007年12月16日《北京晨報》報道，上海誕生世界首例攜綠色熒光蛋白基因的轉(zhuǎn)基因克隆兔，為研究疑難雜癥奠定了基礎。專家介紹，從外表看上去，克隆兔并沒什么與眾不同的地方，但通過設備檢測會發(fā)現(xiàn)它的體內(nèi)可發(fā)出明亮的綠色熒光。由于兔子克隆胚胎發(fā)育率低、懷孕率低、出生后死亡率高，導致了科學家較難培育出轉(zhuǎn)基因克隆兔。下面是我國胎兔(妊娠20天左右的兔胚胎)背部皮膚成纖維細胞克隆試驗基本過程：

(1)為便于在①過程中與綠色熒光蛋白基因連接，質(zhì)粒應該具有的一個明顯特點是________________________________________________________________________。

(2)在②過程進行轉(zhuǎn)基因體細胞的篩選時，采取的選擇措施是

________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

(3)在③過程培養(yǎng)重組細胞時，培養(yǎng)液中通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、________和________等。

(4)對于上述過程敘述合理的是(　　)

A．該培養(yǎng)過程采用了轉(zhuǎn)基因技術(shù)、核移植技術(shù)、動物細胞培養(yǎng)技術(shù)、胚胎移植技術(shù)等

B．在③過程進行重組細胞培養(yǎng)時，要不斷的用胰蛋白酶將其制成單細胞懸浮液

C．甲兔實際為妊娠20天的兔胚胎，原因是此時的細胞還沒有分化，分裂能力很強

D．該熒光兔的性別應該與乙兔相同

(5)研究小組工作人員還指出，轉(zhuǎn)基因克隆兔由于基因(除熒光蛋白基因外)與原來兔子一樣，同樣具有生殖能力，它可以與家兔交配產(chǎn)下后代，因此大家期待這只轉(zhuǎn)基因克隆兔能夠長大，并進一步繁衍后代，從而為人們研究“發(fā)光基因”是否具有遺傳性提供可靠依據(jù)。假設該克隆兔為雌性個體，請寫出判斷“發(fā)光基因”是否具有遺傳性的實驗思路及預測結(jié)果結(jié)論。

實驗思路： _______________________________________________________________

________________________________________________________________________。

預測結(jié)果結(jié)論：①_______________________________________________________

________________________________________________________________________；

②________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

2008年諾貝爾化學獎授予了三位在研究綠色熒光蛋白(GFP)方面做出突出貢獻的科學家。綠色熒光蛋白能在藍光或紫外光的激發(fā)下發(fā)出熒光，這樣借助GFP發(fā)出的熒光就可以跟蹤蛋白質(zhì)在細胞內(nèi)部的移動情況，幫助推斷蛋白質(zhì)的功能。GFP基因可作為目的基因用于培育綠色熒光小鼠，下圖表示培育綠色熒光小鼠的基本流程：

請根據(jù)上述材料回答下列問題：

(1)過程①必需用到的工具酶是________。

(2)過程②將基因表達載體導入小鼠受精卵時，采用最多也最有效的方法是________________。然后還可以通過________技術(shù)來檢測綠色熒光蛋白基因是否已導入成功。

(3)在進行過程④前，利用________技術(shù)可以獲得數(shù)目更多且基因型相同的綠色熒光小鼠。

(4)GFP基因與目的基因一起構(gòu)建到運載體上不影響目的基因的表達，也不影響由目的基因控制合成的蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能，且對細胞無毒性作用，因此GFP基因可以運用作為基因表達載體上的________。