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科學(xué)家將魚抗凍蛋白基因轉(zhuǎn)入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相對寒冷的環(huán)境中生長。質(zhì)粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四種限制酶切割位點，下圖是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程的示意圖（ampr為抗氨芐青霉素基因），其中①—④是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程中的相關(guān)步驟，Ⅰ、Ⅱ表示相關(guān)結(jié)構(gòu)或細(xì)胞。請據(jù)圖作答：

（1）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時，可用一種或者多種限制酶進(jìn)行切割。為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，在此實例中，應(yīng)該選用限制酶                  分別對            進(jìn)行切割，切割后產(chǎn)生的DNA片段分別為             種。
（2）培養(yǎng)基中的氨芐青霉素會抑制番茄愈傷組織細(xì)胞的生長，要利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入含魚的抗凍蛋白基因的番茄細(xì)胞，應(yīng)使基因表達(dá)載體Ⅰ中含有           作為標(biāo)記基因。
（3）研究人員通常采用        法將魚抗凍蛋白基因?qū)�入番茄�?xì)胞內(nèi)。通常采用      技術(shù)，在分子水平檢測目的基因是否翻譯形成了相應(yīng)的蛋白質(zhì)。
（4）利用組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入含魚的抗凍蛋白基因的番茄組織細(xì)胞培育成植株。圖中③、④依次表示組織培養(yǎng)過程中番茄組織細(xì)胞的               過程。

科學(xué)家將魚抗凍蛋白基因轉(zhuǎn)入番茄，使番茄細(xì)胞的耐寒能力大大提高，可以在相對寒冷的環(huán)境中生長。質(zhì)粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四種限制酶切割位點，下圖是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程的示意圖(amp^r為抗氨芐青霉素基因)，其中①～④是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程中的相關(guān)步驟，Ⅰ、Ⅱ表示相關(guān)結(jié)構(gòu)或細(xì)胞。請據(jù)圖回答問題。

(1)在構(gòu)建基因表達(dá)載體時，可用一種或者多種限制酶進(jìn)行切割。為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，在此實例中，應(yīng)該選用___________, __________限制酶，分別對_______________, ______________進(jìn)行切割。
(2)培養(yǎng)基中的氨芐青霉素會抑制番茄愈傷組織細(xì)胞的生長，要利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入魚抗凍蛋白基因的番茄細(xì)胞，應(yīng)使基因表達(dá)載體中含有________________________，作為標(biāo)記基因。
(3)研究人員通常采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將魚抗凍蛋白基因?qū)�入番茄�?xì)胞內(nèi)。通常采用______________________技術(shù)，在分子水平檢測目的基因是否翻譯形成了相應(yīng)的蛋白質(zhì)。
(4)利用組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入魚抗凍蛋白基因的番茄組織細(xì)胞培育成植株。圖中③、④依次表示組織培養(yǎng)過程中番茄組織細(xì)胞的____________, ______________過程。

（12分）科學(xué)家將魚抗凍蛋白基因轉(zhuǎn)入番茄，使番茄植株的耐寒能力大大提高，可以在相對寒冷的環(huán)境中生長。質(zhì)粒上有Pst I 、Sma I 、Hind III 、Alul 等四種限制酶切割位點，下圖是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程的示意圖（amp^r為抗氨芐青霉素基因），其中①—④是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程中的相關(guān)步驟，I 、II 表示相關(guān)結(jié)構(gòu)或細(xì)胞。請據(jù)圖作答：

（l）基因工程的核心是_______________________________。
(2)構(gòu)建基因表達(dá)載體時，可用一種或多種限制酶進(jìn)行切割。為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，在此實例中，應(yīng)該選用                酶，分別對目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行切割，切割后產(chǎn)生的DNA 片段分別為      種和      種。
（3）要篩選已導(dǎo)入含魚的抗凍蛋白基因的番茄細(xì)胞,應(yīng)首先選擇含                     的培養(yǎng)基中篩選番茄組織細(xì)胞。
（4）研究人員通常采用                       法將魚抗凍蛋白基因?qū)�入番茄�?xì)胞內(nèi).
(5)基因工程操作中的第四步是目的基因的檢測與鑒定,在分子水平檢測目的基因是否翻譯形成了相應(yīng)的蛋白質(zhì)通常采用   __________   技術(shù)，。采用   __________ 方法在個體生物學(xué)水平上檢測目的基因是否表達(dá)。
(6)圖中③④分別指的是           、           ,欲獲得人工種子應(yīng)培養(yǎng)到___________階段。將II細(xì)胞培養(yǎng)成完整植物體所用技術(shù)的理論基礎(chǔ)是___________________________。

（6分）科學(xué)家將魚抗凍蛋白基因轉(zhuǎn)入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相對寒冷的環(huán)境中生長。質(zhì)粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四種限制酶切割位點，下圖是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程的示意圖（ampr為抗氨芐青霉素基因），其中①～④是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程中的相關(guān)步驟，Ⅰ、Ⅱ表示相關(guān)結(jié)構(gòu)或細(xì)胞。請據(jù)圖作答：
 
（1）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時，可用一種或者多種限制酶進(jìn)行切割。為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，在此實例中，應(yīng)該選用限制酶＿＿＿＿＿＿＿＿分別對＿＿＿＿進(jìn)行切割，切割后產(chǎn)生的DNA片段分別為          、         種。
（2）培養(yǎng)基中的氨芐青霉素會抑制番茄愈傷組織細(xì)胞的生長，要利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入含魚的抗凍蛋白基因的番茄細(xì)胞，應(yīng)使基因表達(dá)載體Ⅰ中含有＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿作為標(biāo)記基因。
（3）研究人員通常采用＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿法將魚抗凍蛋白基因?qū)�入番茄�?xì)胞內(nèi)。通常采用＿＿＿＿＿＿＿＿技術(shù)，在分子水平檢測目的基因是否翻譯形成了相應(yīng)的蛋白質(zhì)。

（10分）科學(xué)家將魚抗凍蛋白基因轉(zhuǎn)入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相對寒冷的環(huán)境中生長。質(zhì)粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四種限制酶切割位點，下圖是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程的示意圖（ampr為抗氨芐青霉素基因），其中①～④是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程中的相關(guān)步驟，Ⅰ、Ⅱ表示相關(guān)結(jié)構(gòu)或細(xì)胞。請據(jù)圖作答：

（1）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時，可用一種或者多種限制酶進(jìn)行切割。為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，在此實例中，應(yīng)該選用限制酶___________和限制酶___________分別對___________（2分）和質(zhì)粒進(jìn)行切割。
（2）培養(yǎng)基中的氨芐青霉素會抑制番茄愈傷組織細(xì)胞的生長，要利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入含魚的抗凍蛋白基因的番茄細(xì)胞，應(yīng)使基因表達(dá)載體Ⅰ中含有______作為標(biāo)記基因。
（3）研究人員通常采用___________法將魚抗凍蛋白基因?qū)�入番茄�?xì)胞內(nèi)。在分子水平檢測目的基因是否翻譯形成了相應(yīng)的蛋白質(zhì)通常采用___________（2分）技術(shù)。
（4）利用組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入含魚的抗凍蛋白基因的番茄組織細(xì)胞培育成植株。圖中③、④依次表示組織培養(yǎng)過程中番茄組織細(xì)胞的___________和___________過程。

科學(xué)家將魚抗凍蛋白基因轉(zhuǎn)入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相對寒冷的環(huán)境中生長。質(zhì)粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四種限制酶切割位點，下圖是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程的示意圖（ampr為抗氨芐青霉素基因），其中①～④是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程中的相關(guān)步驟，Ⅰ、Ⅱ表示相關(guān)結(jié)構(gòu)或細(xì)胞。請據(jù)圖作答：

（1）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時，可用一種或者多種限制酶進(jìn)行切割。為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，在此實例中，應(yīng)該選用限制酶＿＿＿＿＿＿＿＿分別對_____________________進(jìn)行切割，切割后產(chǎn)生的DNA片段分別為＿＿＿種。
（2）培養(yǎng)基中的氨芐青霉素會抑制番茄愈傷組織細(xì)胞的生長，要利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入含魚的抗凍蛋白基因的番茄細(xì)胞，應(yīng)使基因表達(dá)載體Ⅰ中含有＿＿＿＿＿＿＿＿作為標(biāo)記基因。
（3）研究人員通常采用＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿法將魚抗凍蛋白基因?qū)�入番茄�?xì)胞內(nèi)。通常采用＿＿＿＿＿＿＿＿技術(shù)，在分子水平檢測目的基因是否翻譯形成了相應(yīng)的蛋白質(zhì)。
（4）利用組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入含魚的抗凍蛋白基因的番茄組織細(xì)胞培育成植株。圖中③、④依次表示組織培養(yǎng)過程中番茄組織細(xì)胞的＿＿＿＿ ＿＿＿＿過程。

科學(xué)家將魚抗凍蛋白基因轉(zhuǎn)入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相對寒冷的環(huán)境中生長。質(zhì)粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四種限制酶切割位點，下圖是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程的示意圖（amp^r為抗氨芐青霉素基因），其中①～②是重組基因的合成過程中的相關(guān)步驟，Ⅰ、Ⅱ表示相關(guān)結(jié)構(gòu)或細(xì)胞。請據(jù)圖作答：

（1）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時，可用一種或者多種限制酶進(jìn)行切割。為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，在此實例中，應(yīng)該選用限制酶             分別對                                進(jìn)行切割，切割后產(chǎn)生的DNA片段分別為              種。
（2）培養(yǎng)基中的氨芐青霉素會抑制番茄愈傷組織細(xì)胞的生長，要利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入含魚的抗凍蛋白基因的番茄細(xì)胞，應(yīng)使基因表達(dá)載體Ⅰ中含有                  作為標(biāo)記基因。
（3）研究人員通常采用                   法將魚抗凍蛋白基因?qū)�入番茄�?xì)胞內(nèi)。通常采用　　 　　              技術(shù)，在分子水平檢測目的基因是否翻譯形成了相應(yīng)的蛋白質(zhì)。

科學(xué)家將魚抗凍蛋白基因轉(zhuǎn)入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相對寒冷的環(huán)境中生長。質(zhì)粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四種限制酶切割位點，下圖是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄（雙子葉）培育過程的示意圖（ampr為抗氨芐青霉素基因），其中①～④是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程中的相關(guān)步驟，Ⅰ、Ⅱ表示相關(guān)結(jié)構(gòu)或細(xì)胞。請據(jù)圖作答：（9分）
 
（1）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時，可用一種或者多種限制酶進(jìn)行切割。為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，在此實例中，應(yīng)該選用限制酶＿＿＿＿＿＿＿＿分別對＿＿      和    ＿＿進(jìn)行切割，切割后產(chǎn)生的DNA片段分別為＿ 和 ＿＿種。
（2）培養(yǎng)基中的氨芐青霉素會抑制番茄愈傷組織細(xì)胞的生長，要利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入含魚的抗凍蛋白基因的番茄細(xì)胞，應(yīng)使基因表達(dá)載體Ⅰ中含有＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿作為標(biāo)記基因。
（3）研究人員通常采用＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿法將魚抗凍蛋白基因?qū)�入番茄�?xì)胞內(nèi)。通常采用＿＿＿＿＿＿＿＿技術(shù)，在分子水平檢測目的基因是否翻譯形成了相應(yīng)的蛋白質(zhì)。
（4）利用組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入含魚的抗凍蛋白基因的番茄組織細(xì)胞培育成植株。圖中③、④依次表示組織培養(yǎng)過程中番茄組織細(xì)胞的＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿過程。

（12分）科學(xué)家將魚抗凍蛋白基因轉(zhuǎn)入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相對寒冷的環(huán)境中生長。質(zhì)粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四種限制酶切割位點，下圖是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程的示意圖（ampr為抗氨芐青霉素基因），其中①～④是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程中的相關(guān)步驟，Ⅰ、Ⅱ表示相關(guān)結(jié)構(gòu)或細(xì)胞。請據(jù)圖作答：

（1）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時，可用一種或者多種限制酶進(jìn)行切割。為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，在此實例中，應(yīng)該選用限制酶           分別對          進(jìn)行切割，切割后產(chǎn)生的DNA片段分別為       種。

（2）培養(yǎng)基中的氨芐青霉素會抑制番茄愈傷組織細(xì)胞的生長，要利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入含魚的抗凍蛋白基因的番茄細(xì)胞，應(yīng)使基因表達(dá)載體Ⅰ中含有                 作為標(biāo)記基因。

（3）研究人員通常采用            法將魚抗凍蛋白基因?qū)�入番茄�?xì)胞內(nèi)。

（4）利用組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入含魚的抗凍蛋白基因的番茄組織細(xì)胞培育成植株。圖中③、④依次表示組織培養(yǎng)過程中番茄組織細(xì)胞的             過程。

科學(xué)家將魚抗凍蛋白基因轉(zhuǎn)入番茄，使番茄細(xì)胞的耐寒能力大大提高，可以在相對寒冷的環(huán)境中生長。質(zhì)粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四種限制酶切割位點，下圖是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程的示意圖(amp^r為抗氨芐青霉素基因)，其中①～④是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程中的相關(guān)步驟，Ⅰ、Ⅱ表示相關(guān)結(jié)構(gòu)或細(xì)胞。請據(jù)圖回答問題。

(1)在構(gòu)建基因表達(dá)載體時，可用一種或者多種限制酶進(jìn)行切割。為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，在此實例中，應(yīng)該選用___________, __________限制酶，分別對_______________, ______________進(jìn)行切割。

(2)培養(yǎng)基中的氨芐青霉素會抑制番茄愈傷組織細(xì)胞的生長，要利用該培養(yǎng)基篩選已導(dǎo)入魚抗凍蛋白基因的番茄細(xì)胞，應(yīng)使基因表達(dá)載體中含有________________________，作為標(biāo)記基因。

(3)研究人員通常采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將魚抗凍蛋白基因?qū)�入番茄�?xì)胞內(nèi)。通常采用______________________技術(shù)，在分子水平檢測目的基因是否翻譯形成了相應(yīng)的蛋白質(zhì)。

(4)利用組織培養(yǎng)技術(shù)將導(dǎo)入魚抗凍蛋白基因的番茄組織細(xì)胞培育成植株。圖中③、④依次表示組織培養(yǎng)過程中番茄組織細(xì)胞的____________, ______________過程。