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目前基因工程所用的質粒載體主要是以天然細菌質粒的各種元件為基礎重新組建的人工質粒，pBR322質粒是較早構建的質粒載體，其主要結構如圖一所示。

（1）建構基因表達載體時，必須有               、復制原點、目的基因、終止子以及                                    。

（2）構建人工質粒時要有抗性基因，以便于                    。

（3）pBR322分子中有單個EcoRI限制酶作用位點，EcoRl只能識別序列—GAATTC一，并只能在G與A之間切割。若在某目的基因的兩側各有1個EcoRl的切點，請畫出目的基因兩側被限制酶EcoRI切割后所形成的黏性末端                   。

（4）pBR322分子中另有單個的BamHI限制酶作用位點，現(xiàn)將經BamHI處理后的質粒與用另一種限制酶BglⅡ處理得到的目的基因，通過DNA連接酶作用恢復         ，成功獲得了重組質粒。說明                         。

（5）為了檢測上述重組質粒是否導入原本無amp^R和tet^R的大腸桿菌，將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖二的菌落；再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖三的結果（空圈表示與圖二對照無菌落的位置）。與圖三空圈相對應的圖二中的菌落表現(xiàn)型是            。圖三結果顯示，多數(shù)大腸桿菌導入的是                 。

（11分）目前基因工程所用的質粒載體主要是以天然細菌質粒的各種元件為基礎重新組建的人工質粒，pBR322質粒是較早構建的質粒載體，其主要結構如圖一所示。

(1)構建人工質粒時要有抗性基因，以便于________。觀察上圖，如果A為質粒，則C表示       。
(2)pBR322分子中有單個EcoRⅠ限制酶作用位點，EcoRⅠ只能識別序列—GAATTC—，并只能在G與A之間切割。若在某目的基因的兩側各有1個EcoRⅠ的切點，請畫出目的基因兩側被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端。
_______________________________________________________________________
(3)pBR322分子中另有單個的BamHⅠ限制酶作用位點，現(xiàn)將經BamHⅠ處理后的質粒與用另一種限制酶BglⅡ處理得到的目的基因，通過____________作用恢復________________________鍵，成功地獲得了重組質粒。能形成重組質粒的原因是_______________________________________________________________________
(4) 作為受體大腸桿菌應不含_______________________，以方便篩選已導入重組質粒的受體大腸桿菌。將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖三的結果(空圈表示與圖二對照無菌落的位置)。與圖三空圈相對應的圖二中的菌落表現(xiàn)型是_______，圖三結果顯示，多數(shù)大腸桿菌導入的是______________。
（5）基因工程中使用的限制酶，其特點是_______________________，下圖四種質粒含有E1和E2兩種限制酶的識別，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四環(huán)素的抗性基因。

將兩端用E1切開的Tcr基因與用E1切開的質粒X－1混合連接，連接后獲得的質粒類型有＿＿＿。（可多選）

（11分）目前基因工程所用的質粒載體主要是以天然細菌質粒的各種元件為基礎重新組建的人工質粒，pBR322質粒是較早構建的質粒載體，其主要結構如圖一所示。

(1)構建人工質粒時要有抗性基因，以便于________。觀察上圖，如果A為質粒，則C表示        。

(2)pBR322分子中有單個EcoRⅠ限制酶作用位點，EcoRⅠ只能識別序列—GAATTC—，并只能在G與A之間切割。若在某目的基因的兩側各有1個EcoRⅠ的切點，請畫出目的基因兩側被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端。

_______________________________________________________________________

(3)pBR322分子中另有單個的BamHⅠ限制酶作用位點，現(xiàn)將經BamHⅠ處理后的質粒與用另一種限制酶BglⅡ處理得到的目的基因，通過____________作用恢復________________________鍵，成功地獲得了重組質粒。能形成重組質粒的原因是_______________________________________________________________________

 (4) 作為受體大腸桿菌應不含_______________________，以方便篩選已導入重組質粒的受體大腸桿菌。將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖三的結果(空圈表示與圖二對照無菌落的位置)。與圖三空圈相對應的圖二中的菌落表現(xiàn)型是_______，圖三結果顯示，多數(shù)大腸桿菌導入的是______________。

（5）基因工程中使用的限制酶，其特點是_______________________，下圖四種質粒含有E1和E2兩種限制酶的識別，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四環(huán)素的抗性基因。

將兩端用E1切開的Tcr基因與用E1切開的質粒X－1混合連接，連接后獲得的質粒類型有＿＿＿。（可多選）A．X－1  B．X－2   C．X－3   D．X－4

目前基因工程所用的質粒載體主要是以天然細菌質粒的各種元件為基礎重新組建的人工質粒，pBR322質粒是較早構建的質粒載體，其主要結構如圖一所示。

（1）構建人工質粒時要有抗性基因，以便于                     。

（2）pBR32Z分子中有單個EcoRI限制酶作用位點，EcoR 1只能識別序列一GAATTC一，并只能在G與A之間切割。若在某目的基因的兩側各有1個EcoRI的切點，請畫出目的基因兩側被限制酶EcoRI切割后所形成的黏性末端。                    。

（3）pBR322分子中另有單個的BamHI限制酶作用位點，現(xiàn)將經BamHI處理后的質粒與用另一種限制酶BgIⅡ處理得到的目的基因，通過DNA連接酶作用恢復          鍵，成功的獲得了重組質粒。說明                                      。

（4）為了檢測上述重組質粒是否導入原本無amp^R和tet^R的大腸桿菌，將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖三的結果（空圈表示與圖二對照無菌落的位置）。與圖三空圈相對應的圖二中的菌落表現(xiàn)型是                 ，圖三結果顯示，多數(shù)大腸桿菌導入的是                  。

目前基因工程所用的質粒載體主要是以天然細菌質粒的各種元件為基礎重新組建的人工質粒，pBR322質粒是較早構建的質粒載體，其主要結構如圖一所示。

(1)構建人工質粒時要有抗性基因，以便于________。

(2)pBR322分子中有單個EcoRⅠ限制酶作用位點，EcoRⅠ只能識別序列—GAATTC—，并只能在G與A之間切割。若在某目的基因的兩側各有1個EcoRⅠ的切點，請畫出目的基因兩側被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端。

(3)pBR322分子中另有單個的BamHⅠ限制酶作用位點，現(xiàn)將經BamHⅠ處理后的質粒與用另一種限制酶BglⅡ處理得到的目的基因，通過DNA連接酶作用恢復________鍵，成功地獲得了重組質粒。說明____________________________________________________。

(4)為了檢測上述重組質粒是否導入原本無amp^R和tet^R的大腸桿菌，將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖三的結果(空圈表示與圖二對照無菌落的位置)。與圖三空圈相對應的圖二中的菌落表現(xiàn)型是____________，圖三結果顯示，多數(shù)大腸桿菌導入的是________________。

回答下列關于基因工程的問題：

如圖是將人的生長激素基因導入細菌B細胞內制造“工程菌”示意圖，所用載體為質粒A。已知細菌B細胞內不含質粒A，也不含質粒A上的基因，質粒A導入細菌B后，其上的基因能得到表達，根據(jù)圖示所給信息回答下列問題：

(1)將目的基因和質粒結合形成重組質粒時，用同一種限制性內切酶分別切割目的基因和質粒，露出相同的黏性末端，將切下的目的基因片段插入質粒的切口處再加入適量的             ，使質粒與目的基因結合成重組質粒。

(2)目前把重組質粒導入細菌細胞時，效率還不高；導入完成后得到的細菌，實際上有的根本沒有導入質粒；有的導入的是普通質粒A；只有少數(shù)導入的是重組質粒。此處可以通過如下步驟來鑒別得到的細菌是否導入了質粒A或重組質粒：

將得到的細菌涂抹在一個含有                的培養(yǎng)基上，能夠生長的就是導入質粒A或重組質粒的，反之則沒有。此過程中體現(xiàn)了質粒作為運載體必須具備的兩個條件                      ；                                            。

(3)若進一步鑒定證明細菌中導入的是普通質粒A還是重組質粒，將得到的細菌涂抹在一個含有

                的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，若細菌                ，則導入的是普通質粒。如果利用DNA分子雜交原理來證明此過程，應該用                                    作為探針。

（4）使體外重組的DNA分子轉移到受體細胞內，主要是借鑒                        的途徑。

(5) 目的基因表達成功后，“工程菌”明顯不同于細菌D。從變異的來源看，此變異屬于         

       。導入細菌B細胞中的目的基因成功表達的標志是什么?                    。

回答下列關于基因工程的問題：
如圖是將人的生長激素基因導入細菌B細胞內制造“工程菌”示意圖，所用載體為質粒A。已知細菌B細胞內不含質粒A，也不含質粒A上的基因，質粒A導入細菌B后，其上的基因能得到表達，根據(jù)圖示所給信息回答下列問題：

(1)將目的基因和質粒結合形成重組質粒時，用同一種限制性內切酶分別切割目的基因和質粒，露出相同的黏性末端，將切下的目的基因片段插入質粒的切口處再加入適量的            ，使質粒與目的基因結合成重組質粒。
(2)目前把重組質粒導入細菌細胞時，效率還不高；導入完成后得到的細菌，實際上有的根本沒有導入質粒；有的導入的是普通質粒A；只有少數(shù)導入的是重組質粒。此處可以通過如下步驟來鑒別得到的細菌是否導入了質粒A或重組質粒：
將得到的細菌涂抹在一個含有               的培養(yǎng)基上，能夠生長的就是導入質粒A或重組質粒的，反之則沒有。此過程中體現(xiàn)了質粒作為運載體必須具備的兩個條件                     ；                                           。
(3)若進一步鑒定證明細菌中導入的是普通質粒A還是重組質粒，將得到的細菌涂抹在一個含有
               的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，若細菌               ，則導入的是普通質粒。如果利用DNA分子雜交原理來證明此過程，應該用                                   作為探針。
（4）使體外重組的DNA分子轉移到受體細胞內，主要是借鑒                       的途徑。
(5)目的基因表達成功后，“工程菌”明顯不同于細菌D。從變異的來源看，此變異屬于         
      。導入細菌B細胞中的目的基因成功表達的標志是什么?                   。

回答下列關于基因工程的問題：

如圖是將人的生長激素基因導入細菌B細胞內制造“工程菌”示意圖，所用載體為質粒A。已知細菌B細胞內不含質粒A，也不含質粒A上的基因，質粒A導入細菌B后，其上的基因能得到表達，根據(jù)圖示所給信息回答下列問題：

(1)將目的基因和質粒結合形成重組質粒時，用同一種限制性內切酶分別切割目的基因和質粒，露出相同的黏性末端，將切下的目的基因片段插入質粒的切口處再加入適量的             ，使質粒與目的基因結合成重組質粒。

(2)目前把重組質粒導入細菌細胞時，效率還不高；導入完成后得到的細菌，實際上有的根本沒有導入質粒；有的導入的是普通質粒A；只有少數(shù)導入的是重組質粒。此處可以通過如下步驟來鑒別得到的細菌是否導入了質粒A或重組質粒：

將得到的細菌涂抹在一個含有                的培養(yǎng)基上，能夠生長的就是導入質粒A或重組質粒的，反之則沒有。此過程中體現(xiàn)了質粒作為運載體必須具備的兩個條件                      ；                                            。

(3)若進一步鑒定證明細菌中導入的是普通質粒A還是重組質粒，將得到的細菌涂抹在一個含有

                的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，若細菌                ，則導入的是普通質粒。如果利用DNA分子雜交原理來證明此過程，應該用                                    作為探針。

（4）使體外重組的DNA分子轉移到受體細胞內，主要是借鑒                        的途徑。

(5) 目的基因表達成功后，“工程菌”明顯不同于細菌D。從變異的來源看，此變異屬于         

       。導入細菌B細胞中的目的基因成功表達的標志是什么?                    。

回答下列關于基因工程的問題：

如圖是將人的生長激素基因導入細菌B細胞內制造“工程菌”示意圖，所用載體為質粒A。已知細菌B細胞內不含質粒A，也不含質粒A上的基因，質粒A導入細菌B后，其上的基因能得到表達，根據(jù)圖示所給信息回答下列問題：

（1）將目的基因和質粒結合形成重組質粒時，用同一種限制性內切酶分別切割目的基因和質粒，露出相同的黏性末端，將切下的目的基因片段插入質粒的切口處再加入適量的             ，使質粒與目的基因結合成重組質粒。

（2）目前把重組質粒導入細菌細胞時，效率還不高；導入完成后得到的細菌，實際上有的根本沒有導入質粒；有的導入的是普通質粒A；只有少數(shù)導入的是重組質粒。此處可以通過如下步驟來鑒別得到的細菌是否導入了質粒A或重組質粒：

將得到的細菌涂抹在一個含有                的培養(yǎng)基上，能夠生長的就是導入質粒A或重組質粒的，反之則沒有。此過程中體現(xiàn)了質粒作為運載體必須具備的兩個條件                      ；                                            。

（3）若進一步鑒定證明細菌中導入的是普通質粒A還是重組質粒，將得到的細菌涂抹在一個含有

                的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，若細菌                ，則導入的是普通質粒。如果利用DNA分子雜交原理來證明此過程，應該用                                    作為探針。

（4）使體外重組的DNA分子轉移到受體細胞內，主要是借鑒                        的途徑。

（5）目的基因表達成功后，“工程菌”明顯不同于細菌D。從變異的來源看，此變異屬于   

       。導入細菌B細胞中的目的基因成功表達的標志是什么?                    。