35.(5分)下面是一項(xiàng)“利用轉(zhuǎn)基因番茄生產(chǎn)人胰島素的方法”的專利摘要,請(qǐng)回答:
本發(fā)明利用轉(zhuǎn)基因番茄作為生物反應(yīng)器生產(chǎn)人胰島素。所用的人胰島素基因是依據(jù)植物偏愛(ài)密碼子的原則來(lái)設(shè)計(jì)所含的密碼子,通過(guò)人工合成若干DNA片段,拼接而成,并且在C端加上KDEL的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留序列,避免胰島素在植物細(xì)胞中的降解。將該基因置于CaMV 35S啟動(dòng)子和果實(shí)專一性啟動(dòng)子2A12的驅(qū)動(dòng)之下通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)入番茄中,在番茄的果實(shí)中表達(dá)人胰島素。
(1)此基因工程中的目的基因是________________________,將人工合成的DNA片段拼接在一起,所需要的酶有________________________________。
(2)要想在體外獲得大量該目的基因的片段,可以采用_________技術(shù)。
(3)試分析在C端加上KDEL的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留序列,為什么可以避免胰島素在植物細(xì)胞中的降解?_____________________________________________________。
(4)用目的基因與農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒結(jié)合構(gòu)建表達(dá)載體,該表達(dá)載體的組成中不應(yīng)含有的是_________(從下列選項(xiàng)中選擇)。
①目的基因 ②CaMV 35S啟動(dòng)子 ③果實(shí)專一性啟動(dòng)子2A12
④RNA引物 ⑤標(biāo)記基因 ⑥T-DNA ⑦RNA聚合酶基因片段
⑧終止子