Question

14．請分析回答有關(guān)“土壤中分解尿素細(xì)菌的篩選與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)”的問題．
尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，但若不經(jīng)細(xì)菌的分解，就不能更好地被植物利用．生活在土壤中的微生物種類和數(shù)量繁多，同學(xué)們試圖篩選出能高效降解尿素的細(xì)菌．設(shè)計(jì)了“土壤中分解尿素細(xì)菌的篩選與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)”，過程如圖所示：

（1）為達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康�，本�?shí)驗(yàn)所配置的培養(yǎng)基成分應(yīng)包括：1、2、4、5、9．（填入編號）
①水②無機(jī)鹽（不含氮）  ③NH₄NO₃④尿素  ⑤葡萄糖  ⑥牛肉膏⑦蛋白胨  ⑧伊紅美藍(lán)   ⑨瓊脂
（2）為能夠進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，本實(shí)驗(yàn)應(yīng)采用的接種方法是涂布法，接種工具是無菌玻璃刮鏟．
（3）在接種前，進(jìn)行①～⑤系列操作的意圖是使菌液逐漸按梯度稀釋．根據(jù)題意，為使菌液稀釋10倍，每次應(yīng)加入的無菌水量是9ml．
（4）甲同學(xué)設(shè)計(jì)了“計(jì)算→稱量→溶解→滅菌→倒平板→接種土壤樣本→菌落計(jì)數(shù)”的實(shí)驗(yàn)步驟，該同學(xué)忘記了在滅菌（步驟名稱）之前還需要調(diào)PH值（遺忘的步驟名稱）．
（5）乙同學(xué)分別接種了3個(gè)培養(yǎng)皿，一段時(shí)間后三個(gè)培養(yǎng)皿中分別長出了54個(gè)、46個(gè)、50個(gè)菌落，根據(jù)甲的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，該1g土壤樣本中約有分解尿素的細(xì)菌5×10⁷個(gè)．

Answer 1

分析 1、培養(yǎng)基配置的基本過程：計(jì)算、稱量、溶化、調(diào)pH、滅菌、倒平板五個(gè)步驟．
2、微生物常見的接種的方法：
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落．

解答 解：（1）微生物培養(yǎng)基的成分主要包括碳源、氮源、水、無機(jī)鹽，碳源選擇⑤葡萄糖；要篩選能夠分解尿素細(xì)菌，需要加入④尿素作為唯一氮源；對細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)需要利用稀釋涂布平板法，因此需要在培養(yǎng)基中加入⑨瓊脂作為凝固劑；另外①水和②無機(jī)鹽（不含氮）是培養(yǎng)基必需的．  
（2）為能夠進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，本實(shí)驗(yàn)應(yīng)采用稀釋涂布平板法，接種工具為無菌玻璃刮鏟．
（3）在接種前，進(jìn)行①～⑤系列操作的意圖是使菌液逐漸按梯度稀釋．根據(jù)題意，為使菌液稀釋10倍，菌液取1ml，則每次應(yīng)加入的無菌水量是9ml．
（4）培養(yǎng)基配置的基本過程：計(jì)算、稱量、溶化、調(diào)pH、滅菌、倒平板五個(gè)步驟，甲同學(xué)設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)步驟，該同學(xué)忘記了在滅菌之前還需要調(diào)PH值．
（5）根據(jù)圖解可知，對菌液進(jìn)行稀釋時(shí)共稀釋了10⁶倍，乙同學(xué)分別接種了3個(gè)培養(yǎng)皿，一段時(shí)間后三個(gè)培養(yǎng)皿中分別長出了54個(gè)、46個(gè)、50個(gè)菌落，根據(jù)甲的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，該1g土壤樣本中約有分解尿素的細(xì)菌=（54+46+50）÷3×10⁶=5×10⁷個(gè)．
故答案為：
（1）1、2、4、5、9     
（2）涂布法   無菌玻璃刮鏟
（3）使菌液逐漸按梯度稀釋    橫線上均為9
（4）滅菌  調(diào)PH值          
（5）5×10⁷

點(diǎn)評 本題考查了土壤中分解尿素細(xì)菌的篩選與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)的有關(guān)知識，要求考生能夠識記培養(yǎng)基的成分，明確尿素分解菌篩選時(shí)需要利用尿素作為唯一氮源，掌握稀釋涂布平板法中樣本中細(xì)菌數(shù)目的計(jì)算方法．