Question

17．某質(zhì)粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三種限制酶切割位點(diǎn)，同時(shí)還含有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因．利用此質(zhì)粒獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的過程如圖所示，請(qǐng)回答下列問題．

（1）將抗鹽基因?qū)�入煙草�?xì)胞內(nèi)，使煙草植株產(chǎn)生抗鹽性狀，這種新性狀（變異性狀）的來源屬于基因重組．
（2）如果將抗鹽基因直接導(dǎo)入煙草細(xì)胞，一般情況下，煙草不會(huì)具有抗鹽特性，原因是抗鹽基因在煙草細(xì)胞中不能復(fù)制，也不能表達(dá)（合成抗鹽基因的mRNA）．
（3）在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選用SalⅠ和HindⅢ兩種酶對(duì)質(zhì)粒和含抗鹽基因的DNA進(jìn)行切割，以保證重組DNA序列的唯一性．
（4）將轉(zhuǎn)入抗鹽基因的煙草細(xì)胞培育成完整的植株需要用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，經(jīng)過脫分化和再分化進(jìn)而形成完整植株，此過程除營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外還必須向培養(yǎng)基中添加植物激素（生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素）．
（5）為了確定抗鹽煙草是否培育成功，既要用放射性同位素標(biāo)記的抗鹽基因作探針進(jìn)行分子雜交檢測(cè)，又要用一定濃度的鹽水澆灌煙草植株（將煙草植株移栽到鹽堿地中）的方法從個(gè)體水平鑒定煙草植株的耐鹽性．

Answer 1

分析 分析圖1：圖示為轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的培育過程，首先構(gòu)建基因表達(dá)載體；其次采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞（煙草細(xì)胞）；再采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)將含有目的基因的煙草細(xì)胞培養(yǎng)成轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草．
分析圖2：圖2是篩選含有重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌的過程，培養(yǎng)基A和B中應(yīng)該分別加入氨芐青霉素、四環(huán)素．

解答 解：（1）基因工程的原理是基因重組．
（2）如果將抗鹽基因直接導(dǎo)入煙草細(xì)胞，一般情況下，煙草不會(huì)具有抗鹽特性，原因是抗鹽基因在煙草細(xì)胞中不能穩(wěn)定存在并表達(dá)．
（3）質(zhì)粒和含有目的基因的外源DNA分子上都含有SalI、Hindm、BamHI三種限制酶切割位點(diǎn)，其中BamHI的切割位點(diǎn)位于目的基因上，用該酶切割會(huì)破壞目的基因；若只用SalI一種限制酶切割可能會(huì)導(dǎo)致目的基因與運(yùn)載體反向連接；因此在構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)，應(yīng)選用SalI和HindIII兩種限制酶對(duì)質(zhì)粒和含有抗鹽基因的DNA進(jìn)行切割，以保證重組DNA序列的唯一性．
（4）將轉(zhuǎn)入抗鹽基因的煙草細(xì)胞培育成完整的植株需要用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，愈傷組織經(jīng)再分化進(jìn)而形成完整植株，此過程除營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外還必須向培養(yǎng)基中添加生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素．
（5）為了確定抗鹽煙草是否培育成功，既要用放射性同位素標(biāo)記的目的基因（抗鹽基因）作探針進(jìn)行分子雜交檢測(cè)除了從分子水平上進(jìn)行檢測(cè)，還可以從個(gè)體水平上進(jìn)行鑒定，即用一定濃度的鹽水澆灌煙草植株來鑒定煙草的耐鹽性．
故答案為：
（1）基因重組
（2）復(fù)制 表達(dá)（合成抗鹽基因的mRNA）
（3）SalⅠHindⅢ質(zhì)粒     含抗鹽基因的DNA
（4）植物組織培養(yǎng) 脫分化   再分化  植物激素（生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素）
（5）抗鹽基因    一定濃度的鹽水澆灌煙草植株（將煙草植株移栽到鹽堿地中）

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的培育過程圖，考查基因工程、植物組織培養(yǎng)等知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、工具及操作步驟，能根據(jù)圖中限制酶的位置及題干要求選擇正確的限制酶；能根據(jù)題中信息判斷培養(yǎng)基中抗生素的名稱；識(shí)記植物組織培養(yǎng)過程及條件．