Question

科學家將魚抗凍蛋白基因轉入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相對寒冷的環(huán)境中生長。質粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四種限制酶切割位點，下圖是轉基因抗凍番茄培育過程的示意圖（amp^r為抗氨芐青霉素基因），其中①～②是重組基因的合成過程中的相關步驟，Ⅰ、Ⅱ表示相關結構或細胞。請據(jù)圖作答：

（1）在構建基因表達載體時，可用一種或者多種限制酶進行切割。為了避免目的基因和載體在酶切后產(chǎn)生的末端發(fā)生任意連接，在此實例中，應該選用限制酶              分別對                                 進行切割，切割后產(chǎn)生的DNA片段分別為               種。

（2）培養(yǎng)基中的氨芐青霉素會抑制番茄愈傷組織細胞的生長，要利用該培養(yǎng)基篩選已導入含魚的抗凍蛋白基因的番茄細胞，應使基因表達載體Ⅰ中含有                   作為標記基因。

（3）研究人員通常采用                    法將魚抗凍蛋白基因導入番茄細胞內(nèi)。通常采用　　  　　               技術，在分子水平檢測目的基因是否翻譯形成了相應的蛋白質。

 

Answer 1

【答案】

（1）PstⅠ、SmaⅠ  　    含魚抗凍蛋白基因的DNA、質粒    　    4、2

（2）抗氨芐青霉素基因（amp^r）

（3）農(nóng)桿菌轉化（或基因槍法等，答案合理即給分）    抗原—抗體雜交

【解析】（1）為了防止目的基因和載體酶切后的末端任意連接，應進行雙酶切，即選用限制酶PstⅠ、SmaⅠ分別對含目的基因的DNA和質粒進行切割，含目的基因的DNA切割后產(chǎn)生的片段有4種，質粒切割后產(chǎn)生的片段有2種。

（2）氨芐青霉素可用于篩選含抗氨芐青霉素基因的質粒，所以抗氨芐青霉素基因作為標記基因。

（3）將目的基因導入植物細胞常用的方法是農(nóng)桿菌轉化法，或采用基因槍法或花粉管通道法，通常采用抗原－抗體雜交法檢測目的基因是否翻譯形成了蛋白質。