Question

3．尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，但若不經(jīng)細菌的分解，就不能更好地被植物利用．生活在土壤中的微生物種類和數(shù)量繁多，同學們試圖篩選出能高效降解尿素的細菌．設計了“土壤中分解尿素細菌的篩選與計數(shù)實驗”，過程如圖所示：

（1）在接種前，進行①～⑤系列操作的意圖是使菌液按一定的梯度稀釋．據(jù)題意，每次為使菌液稀釋10倍，應加入的無菌水量是9ml．
（2）為達到實驗目的，本實驗所配置的培養(yǎng)基成分不應包括③、⑥、⑦（填入下列序號）；原因是培養(yǎng)基中只有以尿素為唯一的氮源，才能起到選擇作用．制備該無菌培養(yǎng)基的步驟為“計算→稱量→溶解→滅菌→倒平板”，其中調(diào)節(jié)pH應該在滅菌（填步驟名稱）之前．
①水②無機鹽（不含氮）  ③NH₄ NO₃  ④尿素⑤葡萄糖⑥牛肉膏⑦蛋白胨⑧瓊脂
（3）本實驗采用的接種工具是涂布器．微生物的不同接種技術(shù)的操作方法各不相同，但其核心都是防止雜菌污染．
（4）某同學接種了3個培養(yǎng)皿，一段時間后三個培養(yǎng)皿中分別長出了54個、46個、50個菌落，根據(jù)實驗結(jié)果，該lg土壤樣本中約有分解尿素的細菌5×10⁷個．

Answer 1

分析 1、培養(yǎng)基配置的基本過程：計算、稱量、溶化、調(diào)pH、滅菌、倒平板五個步驟．
2、微生物常見的接種的方法：
①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)．在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落．
②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落．

解答 解：（1）在接種前，進行①～⑤系列操作的意圖是使菌液按一定的梯度稀釋．根據(jù)題意，為使菌液稀釋10倍，菌液取1ml，則每次應加入的無菌水量是9ml．
（2）微生物培養(yǎng)基的成分主要包括碳源、氮源、水、無機鹽，碳源選擇⑤葡萄糖；要篩選能夠分解尿素細菌，需要加入④尿素作為唯一氮源；對細菌進行計數(shù)時需要利用稀釋涂布平板法，因此需要在培養(yǎng)基中加入⑨瓊脂作為凝固劑；另外①水和②無機鹽（不含氮）是培養(yǎng)基必需的．因此，為達到實驗目的，本實驗所配置的培養(yǎng)基成分不應包括③、⑥、⑦；  培養(yǎng)基配置的基本過程：計算、稱量、溶化、調(diào)pH、滅菌、倒平板五個步驟，即調(diào)pH值應該在滅菌之前．
（3）為能夠進行菌落計數(shù)，本實驗應采用稀釋涂布平板法，接種工具為涂布器．微生物的不同接種技術(shù)的操作方法各不相同，但其核心都是防止雜菌污染．  
（4）根據(jù)圖解可知，對菌液進行稀釋時共稀釋了10⁶倍，乙同學分別接種了3個培養(yǎng)皿，一段時間后三個培養(yǎng)皿中分別長出了54個、46個、50個菌落，根據(jù)甲的實驗結(jié)果，該1g土壤樣本中約有分解尿素的細菌=（54+46+50）÷3×10⁶=5×10⁷個．
故答案為：
（1）使菌液按一定的梯度稀釋       9
（2）③、⑥、⑦培養(yǎng)基中只有以尿素為唯一的氮源，才能起到選擇作用    滅菌    
（3）涂布器    防止雜菌污染    
（4）5×10⁷

點評 本題考查了土壤中分解尿素細菌的篩選與計數(shù)實驗的有關知識，要求考生能夠識記培養(yǎng)基的成分，明確尿素分解菌篩選時需要利用尿素作為唯一氮源，掌握稀釋涂布平板法中樣本中細菌數(shù)目的計算方法．