Question

12．科研人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將乙烯形成酶（EFE）反義基因?qū)�入番茄中獲得耐儲(chǔ)存番茄．
（1）科研人員將EFE反義基因與T-DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，將番茄的愈傷組織浸入含有上述重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌菌液中，通過(guò)該菌的轉(zhuǎn)化作用使EFE反義基因進(jìn)入番茄細(xì)胞并插入到細(xì)胞的DNA上．
（2）將上述愈傷組織細(xì)胞進(jìn)行再分化即可誘導(dǎo)得到試管苗，該過(guò)程體現(xiàn)了植物細(xì)胞具有全能性．
（3）為檢測(cè)耐儲(chǔ)存番茄中EFE反義基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，首先要從該番茄中提取mRNA，然后將放射性同位素等記的目的基因（EFE反義基因）作為探針，根據(jù)是否形成雜交帶進(jìn)而判斷EFE反義基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA．從個(gè)體生物水平上鑒定，耐儲(chǔ)存番茄產(chǎn)生的乙烯（激素）比正常的番茄少．

Answer 1

分析 1、農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（約80%的轉(zhuǎn)基因植物都是用這種方法獲得的）：
①農(nóng)桿菌特點(diǎn)：易感染雙子葉植物和裸子植物，對(duì)單子葉植物沒(méi)有感染力；Ti質(zhì)粒的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并整合到受體細(xì)胞的染色體上．
②轉(zhuǎn)化：目的基因插人Ti質(zhì)粒的T-DNA上$\stackrel{進(jìn)入}{→}$農(nóng)桿菌→導(dǎo)入植物細(xì)胞→目的基因整合到植物細(xì)胞染色體上→目的基因的遺傳特性得以穩(wěn)定維持和表達(dá)．
2、目的基因的檢測(cè)和鑒定：
（1）分子水平上的檢測(cè)  
①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)
②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)
③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)
（2）個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）分析題意可知，該目的基因?qū)�入受體細(xì)胞采用了農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，因此需要將EFE反義基因與T-DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，再將番茄的愈傷組織浸入含有上述重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌菌液中，通過(guò)該菌的轉(zhuǎn)化作用使EFE反義基因進(jìn)入番茄細(xì)胞并插入到細(xì)胞的DNA上．
（2）將上述愈傷組織細(xì)胞進(jìn)行再分化即可誘導(dǎo)得到試管苗，該過(guò)程體現(xiàn)了植物細(xì)胞具有全能性．
（3）為檢測(cè)耐儲(chǔ)存番茄中EFE反義基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，首先要從該番茄中提取mRNA，然后將放射性同位素等記的目的基因（EFE反義基因）作為探針，根據(jù)是否形成雜交帶進(jìn)而判斷EFE反義基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA．從個(gè)體生物水平上鑒定，耐儲(chǔ)存番茄產(chǎn)生的乙烯（激素）比正常的番茄少．
故答案為：
（1）農(nóng)桿菌      轉(zhuǎn)化    DNA
（2）再分化    全能性
（3）目的基因（EFE反義基因）        雜交帶         乙烯

點(diǎn)評(píng) 本題考查了基因工程的有關(guān)知識(shí)，要求考生能夠識(shí)掌握因工程的操作步驟，識(shí)記農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法的過(guò)程，識(shí)記植物組織培養(yǎng)的過(guò)程和原理，掌握目的基因檢測(cè)與鑒定的方法．