Question

9．草甘膦的除草機制是抑制植物體內(nèi)EPSPS酶的合成，最終導(dǎo)致植物死亡．但它的使用有時也會影響到農(nóng)作物的正常生長．目前，已發(fā)現(xiàn)可以從一種抗草甘膦的大腸桿菌突變株中分離出EPSPS基因，若將該基因轉(zhuǎn)入農(nóng)作物植物細胞內(nèi)，從而獲得的轉(zhuǎn)基因植物就能耐受高濃度的草甘膦．
（1）將圖1①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反應(yīng)管中有4種DNA片段．

（2）假設(shè)圖1中質(zhì)粒原來BamHⅠ識別位點的堿基序列變?yōu)榱肆硪环N限制酶BclⅠ的堿基序列，現(xiàn)用BclⅠ和HindⅢ切割質(zhì)粒，則該圖1中①的DNA右側(cè)還能選擇BamHⅠ進行切割，并獲得所需重組質(zhì)粒嗎？能 請說明理由切割后露出的黏性末端相同．
（3）若上述假設(shè)成立，并成功形成重組質(zhì)粒，則重組質(zhì)粒D
A．既能被BamHⅠ也能被HindⅢ切開      B．能被BamHⅠ但不能被HindⅢ切開
C．既不能被BamHⅠ也不能被HindⅢ切開  D．能被HindⅢ但不能被BamHⅠ切開
（4）要想檢測導(dǎo)入的EPSPS基因是否表達，在分子水平上可用抗原-抗體雜交方法進行檢測．

Answer 1

分析 1、“分子手術(shù)刀”--限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）
（1）來源：主要是從原核生物中分離純化出來的．
（2）功能：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性．
（3）結(jié)果：經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式：黏性末端和平末端．
2．“分子縫合針”--DNA連接酶
（1）根據(jù)酶的來源不同分為兩類：E．coliDNA連接酶、T₄DNA連接酶．
（2）DNA連接酶連接的是兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵．

解答 解：（1）圖①中，從蘇云金桿菌的DNA被HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后形成3種DNA片段．而質(zhì)粒被HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后形成2種DNA片段，其中有1種與目的基因相同，所以反應(yīng)管中有4種DNA片段．
（2）據(jù)圖分析，由于BamHⅠ和BclⅠ切割DNA后露出的黏性末端相同，質(zhì)粒原來BamHⅠ識別位點的堿基序列變?yōu)橄拗泼窧clⅠ的堿基序列，用BclⅠ和HindⅢ切割質(zhì)粒，用BamHⅠ和HindⅢ切割目的基因，仍能獲得重組質(zhì)粒．（3）根據(jù)酶切位點和識別的堿基序列可知，重組質(zhì)粒只能被能被HindⅢ但不能被BamHⅠ切開．（4）圖中②過程所用的酶為DNA連接酶，作用部位為兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵．
（4）檢測目的基因是否在受體細胞內(nèi)表達的分子水平上的檢測是向分泌物中加入抗體，通過抗原-抗體特異性結(jié)合形成雜交帶加以檢測，如果能形成說明表達，如果不能形成說明沒有表達．
故答案為：
（1）4
（2）能    切割后露出的黏性末端相同
（3）D
（4）抗原-抗體雜交

點評 本題以轉(zhuǎn)Bt毒素蛋白基因植物的培育過程示意圖為載體，考查基因工程的相關(guān)知識，意在考查考生的識圖能力、理解能力和應(yīng)用能力，屬于中等難度題．