Question

圖1表示某細(xì)菌的質(zhì)粒中相關(guān)限制酶的切割位點(diǎn)，圖2表示目的基因所在的DNA中相關(guān)限制酶的切割位點(diǎn)。請(qǐng)分析并回答下列問題：

(1)用SmaⅠ限制酶處理圖1所示的一個(gè)質(zhì)粒會(huì)得到種DNA片段，會(huì)增加個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。
(2)在實(shí)際操作中，最好選用 (填限制酶名稱)同時(shí)切割質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA，其優(yōu)點(diǎn)是能避免目的基因和質(zhì)粒在酶切后產(chǎn)生的片段發(fā)生自身環(huán)化或任意連接，以及便于篩選需要。一個(gè)目的基因通過PCR技術(shù)擴(kuò)增第n次，需要個(gè)引物。
(3)為了篩選獲得含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌，實(shí)驗(yàn)人員首先將經(jīng)轉(zhuǎn)化處理過的大腸桿菌接種在含 (抗生素)的培養(yǎng)基甲中，然后用影印法將該培養(yǎng)基上的菌落按原來的方向印在含 (抗生素)培養(yǎng)基乙上，以篩選獲得含重組質(zhì)粒的細(xì)菌。含重組質(zhì)粒的大腸桿菌在兩種培養(yǎng)基的生長情況是。

經(jīng)檢測(cè)：在上述導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中，目的基因正常轉(zhuǎn)錄形成了mRNA，但其所控制合成的蛋白質(zhì)卻并不具有生物活性，最可能的原因是。

Answer 1

(1)2　4　(2)Pst Ⅰ和Hind Ⅲ酶　  2ⁿ
(3)四環(huán)素　氯霉素
在含四環(huán)素培養(yǎng)基中能生長繁殖，而在含氯霉素培養(yǎng)基中不能生長繁殖
(4)大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)缺乏內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高爾基體(或大腸桿菌缺乏生物膜系統(tǒng))，不能對(duì)多肽鏈進(jìn)行折疊、組裝與修飾

解析試題分析：（1）圖1質(zhì)粒有SmaⅠ限制酶兩個(gè)切割位點(diǎn)，用SmaⅠ限制酶切割該質(zhì)粒會(huì)得到2種2個(gè)DNA片段，每個(gè)DNA片段有2個(gè)游離的磷酸基團(tuán)，所以產(chǎn)生兩個(gè)DNA片段會(huì)增加4個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。
從圖2可知，目的基因的右側(cè)可用PstⅠ限制酶切割，目的基因的左側(cè)可用SmaⅠ限制酶或HindⅢ限制酶切割，但用SmaⅠ限制酶切割質(zhì)粒時(shí)會(huì)破壞兩個(gè)標(biāo)記基因，不利于篩選。所以，最好選用Pst Ⅰ和Hind Ⅲ酶同時(shí)切割質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA，其優(yōu)點(diǎn)是能避免目的基因和質(zhì)粒在酶切后產(chǎn)生的片段發(fā)生自身環(huán)化或任意連接，以及便于篩選需要。
1個(gè)DNA分子復(fù)制第n次共產(chǎn)生了2ⁿ個(gè)DNA分子，由于DNA分子為半保留復(fù)制，其中新合成2個(gè)DNA單鏈，每條新鏈的合成需要1個(gè)引物，所以一個(gè)目的基因通過PCR技術(shù)擴(kuò)增第n次，需要2ⁿ個(gè)引物。
（3）普通質(zhì)粒含有氯霉素和四環(huán)素抗性基因，重組質(zhì)粒只含有四環(huán)素抗性基因，所以在含四環(huán)素培養(yǎng)基中能生長繁殖，而在含氯霉素培養(yǎng)基中不能生長繁殖的菌落即為含重組質(zhì)粒的細(xì)菌。
（4）大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)缺乏內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高爾基體(或大腸桿菌缺乏生物膜系統(tǒng))，不能對(duì)多肽鏈進(jìn)行折疊、組裝與修飾，所以導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中，目的基因正常轉(zhuǎn)錄形成了mRNA，但其所控制合成的蛋白質(zhì)卻并不具有生物活性。
考點(diǎn)：本題考查基因工程相關(guān)知識(shí)，意在考查考生理解所學(xué)知識(shí)要點(diǎn)。