Question

14分）、某質(zhì)粒上有SalI、HindⅢ、BamHI三種限制酶切割位點，同時還含有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因。利用此質(zhì)粒獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的過程如下圖所示，請回答下列問題。

(1)將抗鹽基因?qū)�入煙草細胞�?nèi),使煙草植株產(chǎn)生抗鹽性狀，這種新性狀(變異性狀)的來源屬于______                         。
(2)如果將抗鹽基因直接導入煙草細胞,一般情況下，煙草不會具有抗鹽特性，原因是抗鹽基因在煙草細胞中不能復(fù)制，也不能______                   。
(3)在構(gòu)建重組質(zhì)粒時,應(yīng)選用______      和_____       _兩種酶對______          和_____              _進行切割，以保證重組DNA序列的唯一性。
(4)基因工程中的檢測篩選是一個重要的步驟。為篩選出導入了重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌，下圖表示運用影印培養(yǎng)法(使一系列培養(yǎng)皿的相同位置上能出現(xiàn)相同菌落的一種接種培養(yǎng)方法)檢測基因表達載體是否導入了農(nóng)桿菌。

培養(yǎng)基除了含有細菌生長繁殖必需的成分外，培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B分別還含有______      、_____            _。從檢測篩選的結(jié)果分析，含有目的基因的是______      菌落中的細菌。為了確定抗鹽煙草是否培育成功，既要用放射性同位素標記的______          作探針進行分子雜交檢測，又要用一定濃度的鹽水澆灌煙草植株從       水平鑒定煙草植株的耐鹽性。
(5)將轉(zhuǎn)入抗鹽基因的煙草細胞培育成完整的植株需要用_______         技術(shù)，愈傷組織經(jīng)______              進而形成完整植株,此過程除營養(yǎng)物質(zhì)外還必須向培養(yǎng)基中添加                     。

Answer 1

（1）基因重組  （2）表達（合成抗鹽基因的mRNA） （3）Sal I   Hind III    質(zhì)粒 抗鹽基因的DNA   （4）氨芐青霉素   四環(huán)素（氨芐青霉素和四環(huán)素）   4和6    抗鹽基因 個體性狀  （5）植物組織培養(yǎng)   細胞增殖和分化    植物激素（生長素和細胞分裂素）

解析試題分析：（1）基因工程的原理是基因重組。（2）抗鹽基因直接導入煙草細胞,煙草不會具有抗鹽特性，原因是抗鹽基因在煙草細胞中不能復(fù)制，也不能合成抗鹽基因的mRNA，翻譯成相應(yīng)的蛋白質(zhì)，即不能表達。（3）根據(jù)題干信息，在構(gòu)建重組質(zhì)粒時,應(yīng)選用Sal I 和Hind III 兩種限制酶對質(zhì)粒和抗鹽基因進行切割，以保證重組DNA序列的唯一性。（4）基因工程的第四步是目的基因的檢測和鑒定。檢測是通過質(zhì)粒上的標記基因來進行的，即把農(nóng)桿菌放在含有氨芐青霉素和四環(huán)素的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)篩選。根據(jù)篩選的結(jié)果，含目的基因的是4和6菌落中的細菌。而鑒定是通過DNA分子雜交技術(shù)，即用放射性同位素標記的抗鹽基因做探針，與受體細胞中的DNA分子進行雜交，來確定目的基因存在，還需要用一定濃度的鹽水澆灌煙草植株從個體性狀水平來鑒定煙草的耐鹽性。（5）將轉(zhuǎn)入抗鹽基因的煙草細胞培育成完整的植株需要用采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，先經(jīng)過脫分化形成愈傷組織，再經(jīng)過再分化，即細胞增殖和分化形成胚狀體，最后形成完整的植株。整個培養(yǎng)過程，需要添加植物激素中的生長素和細胞分裂素。
考點：本題考查基因工程的相關(guān)知識，意在考查考生理解所學知識的要點，把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系的能力。