Question

隨著人類(lèi)基因組計(jì)劃的進(jìn)展以及多種生物基因測(cè)序工作的完成，人類(lèi)跨入了蛋白質(zhì)時(shí)代．對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行研究和應(yīng)用，首先需要獲得高純度的蛋白質(zhì)．請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步：

 

、

 

、

 

和純度鑒定．
（2）如果要從紅細(xì)胞中分離出血紅蛋白，實(shí)驗(yàn)前取新鮮血液時(shí)要在采血容器中預(yù)先加入檸檬酸鈉溶液，這樣做的目的是

 

．
（3）血紅蛋白的提取又可以細(xì)分為：紅細(xì)胞的洗滌、

 

、分離血紅蛋白溶液和

 

．其中分離血紅蛋白溶液時(shí)需要用

 

（儀器）分出下層紅色透明液體．
（4）凝膠色譜法：也稱(chēng)做

 

，是根據(jù)

 

的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法．在凝膠色譜法分離過(guò)程中，血紅蛋白比分子量較小的雜蛋白移動(dòng)

 

．
（5）SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳消除了凈電荷對(duì)遷移率的影響，使電泳遷移率完全取決
于

 

．經(jīng)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行

 

鑒定
（6）粗分離中透析的目的是去除相對(duì)分子質(zhì)量較

 

的雜質(zhì)
（7）裝填凝膠色譜柱時(shí)，要注意色譜柱內(nèi)不能有氣泡存在，一旦發(fā)現(xiàn)有氣泡，凝膠色譜柱必須重新裝填．色譜柱制作成功的標(biāo)志是

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：蛋白質(zhì)的提取和分離

專(zhuān)題：

分析：血紅蛋白提取和分離的程序可分為四大步，包括：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定．首先通過(guò)洗滌紅細(xì)胞、血紅蛋白的釋放、離心等操作收集到血紅蛋白溶液，即樣品的處理；再經(jīng)過(guò)透析去除分子量較小的雜質(zhì)，即樣品的粗分離；然后通過(guò)凝膠色譜法將相對(duì)分子質(zhì)量大的雜質(zhì)蛋白除去，即樣品的純化；最后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行純度鑒定．

解答： 解：（1）血紅蛋白提取和分離的程序可分為四大步，包括：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定．
（2）檸檬酸鈉可以防止血液凝固．
（3）血紅蛋白的提取和分離過(guò)程中的樣品處理階段包括紅細(xì)胞的洗滌、血紅蛋白的釋放、分離血紅蛋白溶液和透析，其中分離血紅蛋白溶液時(shí)需要用分液漏斗分出下層紅色透明液體．
（4）樣品純化是通過(guò)凝膠色譜法（分配色譜法）去掉分子量較大的雜質(zhì)．凝膠色譜法是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量大小分離蛋白質(zhì)的有效方法，相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程長(zhǎng)，移動(dòng)的速度慢，相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)不容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程短，移動(dòng)的速度快．
（5）一般采用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行純度鑒定．在SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)中，消除了凈電荷對(duì)遷移率的影響，所以分子的遷移速率主要取決于分子的大�。�
（6）血紅蛋白溶液的粗分離采用的方法是透析，即將集的血紅蛋白溶液放在透析袋中進(jìn)行透析，去掉分子量較小的雜質(zhì)，原理是小分子雜質(zhì)可以通過(guò)透析袋進(jìn)入緩沖液中，血紅蛋白分子量較大，不能通過(guò)透析袋進(jìn)入緩沖溶液．
（7）裝填凝膠色譜柱時(shí)，紅色區(qū)帶均勻一致地移動(dòng)是色譜柱制作成功的標(biāo)志．
故答案為：
（1）樣品處理　粗分離　純化
（2）防止血液凝固
（3）血紅蛋白的釋放　透析　分液漏斗
（4）分配色譜法   相對(duì)分子質(zhì)量   快
（5）分子的大小  純度  
（6）小
（7）紅色區(qū)帶均勻一致地移動(dòng)

點(diǎn)評(píng)：本題考查血紅蛋白提取和分離的相關(guān)知識(shí)，考查基本，來(lái)自課本，是基礎(chǔ)知識(shí)考試的理想題目，學(xué)生應(yīng)理解加記憶．