Question

5．R一7是家蠶體內(nèi)的一種小分子非編碼RNA，可與某些mRNA尾端的一段非編碼序列（3′-UTR）結(jié)合，進(jìn)而影響基因的表達(dá)．為研究R一7是否影響家蠶基因B（調(diào)控家蠶眼睛發(fā)育）的表達(dá)，科研人員將基因B中對(duì)應(yīng)3′一UTR的刀NA片段與熒光素酶基因（R一7不影響熒光素酶基因的表達(dá)）重組后導(dǎo)入家蠶胚胎細(xì)胞觀察其表達(dá)結(jié)果．請(qǐng)回答：
（l）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增基因B對(duì)應(yīng)3′一UTR的DNA片段，應(yīng)先依據(jù)該基因的一段核甘酸序列合成引物．
（2）利用限制酶（或限制性核酸內(nèi)切酶）和DNA連接酶可將上述DNA片段插入熒光素酶基因表達(dá)載體（如圖1）上的位點(diǎn)2，構(gòu)建重組載體．
（3）將重組載體與R一7共同導(dǎo)入家蠶胚胎細(xì)胞，同時(shí)應(yīng)設(shè)置兩個(gè)對(duì)照組，即將熒光素酶基因表達(dá)載體、重組載體分別導(dǎo)入兩組家蠶胚胎細(xì)胞．
（4）科研人員分別從實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞中提取蛋白質(zhì)，經(jīng)處理檢測(cè)后獲得相對(duì)熒光值（在適宜條件下，熒光素酶可催化熒光素發(fā)生氧化反應(yīng)并發(fā)出熒光），其結(jié)果如圖2．
（5）依據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可推斷，R一7影響基因B的表達(dá)，即通過遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，R一7與基因B所轉(zhuǎn)錄的mRNA的3’一uTR結(jié)合，進(jìn)而抑制（填“促進(jìn)”或“抑制”）基因B的表達(dá)．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（l）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增基因B對(duì)應(yīng)3′一UTR的DNA片段，應(yīng)先依據(jù)該基因的一段核甘酸序列合成引物．
（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，首先需要用限制酶切割運(yùn)載體和含有目的基因的外源DNA分子，其次需要用DNA連接酶將目的基因和運(yùn)載體連接形成重組DNA分子；目的基因插入的位置應(yīng)該在啟動(dòng)子和終止子之間，且不能破壞熒光素基因，因此可將上述DNA片段插入熒光素酶基因表達(dá)載體上的位點(diǎn)2，構(gòu)建重組載體．
（3）將重組載體與R一7共同導(dǎo)入家蠶胚胎細(xì)胞，同時(shí)應(yīng)設(shè)置兩個(gè)對(duì)照組，即將熒光素酶基因表達(dá)載體、重組載體分別導(dǎo)入兩組家蠶胚胎細(xì)胞．
（4）基因表達(dá)產(chǎn)物是蛋白質(zhì)．
（5）基因表達(dá)是指基因控制蛋白質(zhì)的合成，包括轉(zhuǎn)錄和翻譯兩個(gè)步驟．R一7影響基因B的表達(dá)，即通過遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，R一7與基因B所轉(zhuǎn)錄的mRNA的3’一uTR結(jié)合，使基因B表達(dá)的翻譯過程失去模板，因此R一7抑制基因B的表達(dá)．
故答案為：
（1）引物
（2）限制酶（或限制性核酸內(nèi)切酶）和DNA連接酶    2 
（3）熒光素酶基因表達(dá)載體   重組載體
（4）蛋白質(zhì) 
（5）堿基互補(bǔ)配對(duì)   抑制

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、操作工具及操作步驟，掌握基因工程技術(shù)的相關(guān)應(yīng)用，能結(jié)合圖中信息準(zhǔn)確答題，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．