Question

1．如圖為培育轉(zhuǎn)基因小鼠的部分過(guò)程示意圖．請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）若需在短時(shí)間內(nèi)獲得較多的目的基因，通常采用PCR技術(shù)．若需在短時(shí)間內(nèi)獲得較多的
轉(zhuǎn)基因小鼠，可以將處于桑椹胚或囊胚期的早期胚胎進(jìn)行胚胎分割移植．
（2）目的基因不能直接、單獨(dú)注入A細(xì)胞的原因是目的基因不能在受體細(xì)胞穩(wěn)定存在（并遺傳給下一代）和表達(dá)，因此需要構(gòu)建含有目的基因的表達(dá)載體（或重組質(zhì)粒）．
（3）圖中的A細(xì)胞通常為受精卵細(xì)胞，將目的基因?qū)�入該�?xì)胞常用的方法是顯微注射法．
（3）小鼠出生后可用其尾巴進(jìn)行DNA檢測(cè)，通過(guò)DNA分子雜交方法，檢測(cè)出攜帶目的基因的小鼠．至于目的基因是否合成相應(yīng)的蛋白質(zhì)，可從轉(zhuǎn)基因小鼠中提取蛋白質(zhì)，并用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原-抗體雜交，若有雜交帶出現(xiàn)，則表明小鼠體內(nèi)的目的基因已表達(dá)．
（4）在目的基因?qū)�入小鼠的A細(xì)胞時(shí)，目的基因可能隨機(jī)地插入到該細(xì)胞的DNA中．這些細(xì)胞有的能發(fā)育成轉(zhuǎn)基因小鼠，有的卻死亡．請(qǐng)分析目的基因插入后導(dǎo)致有些A細(xì)胞死亡的最可能原因外源基因的插入使受精卵內(nèi)生命活動(dòng)必需的某些基因不能正常表達(dá)．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）體外擴(kuò)增DNA（基因）應(yīng)用PCR技術(shù)．來(lái)自同一個(gè)胚胎的后代具有相同的遺傳物質(zhì)，因此要在短時(shí)間內(nèi)獲得較多的轉(zhuǎn)基因小鼠，可采用胚胎分割移植技術(shù)，一般選項(xiàng)發(fā)育良好、形態(tài)正常的桑椹胚或囊胚進(jìn)行切割．
（2）由于目的基因不能在受體細(xì)胞穩(wěn)定存在（并遺傳給下一代）和表達(dá)，因此將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞前需要構(gòu)建基因表達(dá)載體．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，如受體細(xì)胞是動(dòng)物細(xì)胞常用受精卵，導(dǎo)入的方法是顯微注射法．
（4）檢測(cè)外源基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞用DNA分子雜交技術(shù)，檢測(cè)目的基因是否成功表達(dá)蛋白質(zhì)采用抗原-抗體雜交技術(shù)，如出現(xiàn)雜交帶，則表明已表達(dá)．
（5）外源基因?qū)�入使小鼠死亡，可能是小鼠發(fā)育所必需的蛋白質(zhì)不存在，即這些基因可能被破壞不能正常表達(dá)．
答案：
（1）PCR    桑椹胚或囊胚期    胚胎分割移植
（2）目的基因不能在受體細(xì)胞穩(wěn)定存在（并遺傳給下一代）和表達(dá)     表達(dá)載體（或重組質(zhì)粒）
（3）受精卵    顯微注射法
（4）DNA分子雜交    抗原-抗體      已表達(dá)
（5）外源基因的插入使受精卵內(nèi)生命活動(dòng)必需的某些基因不能正常表達(dá)

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)問(wèn)題，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題，屬于考綱識(shí)記和理解層次的考查．