Question

常見的釀酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖，自然界中一些酵母菌能分解木糖產(chǎn)生酒精但對酒精的耐受能力較差。下面是利用木糖發(fā)酵產(chǎn)生酒精的釀酒酵母的培育過程，請分析回答下列問題。
(1)將自然界中采集到的葡萄帶回實驗室，用________將葡萄皮上的微生物沖洗到無菌的三角瓶中，瓶中的液體經(jīng)適當稀釋后，用________方法接種于固體培養(yǎng)基上，在適宜的條件下培養(yǎng)，獲得各種菌落。
(2)將培養(yǎng)基上的酵母菌菌株轉接到以木糖為唯一碳源的培養(yǎng)基中，無氧條件下培養(yǎng)一周后，有些酵母菌死亡，說明這些酵母菌________。從存活的酵母菌提取DNA，并用PCR技術大量擴增目的基因。
(3)將目的基因連接到一種穿梭質粒(可以在大腸桿菌中復制和在釀酒酵母中表達的質粒)上。該質粒具有兩種標記基因，即氨芐青霉素抗性基因和尿嘧啶合成酶基因。大腸桿菌被該質粒轉化后，應接種于含________的培養(yǎng)基上進行篩選。將質粒導入酵母菌時，由于氨芐青霉素不能抑制酵母菌繁殖，應選擇缺乏________能力的釀酒酵母作為受體菌。從細胞結構看，酵母菌不同于大腸桿菌的主要特點是________。
(4)對轉基因釀酒酵母發(fā)酵能力進行測試，結果如圖所示：

據(jù)圖分析，將轉基因釀酒酵母接種在以________為碳源的培養(yǎng)基中進行發(fā)酵能力測試，最初培養(yǎng)基中的________糖被快速消耗，隨著發(fā)酵繼續(xù)進行，轉基因釀酒酵母能夠___________________，說明所需菌株培育成功。

Answer 1

（1）無菌水 稀釋涂布平板法 （2）不能利用木糖發(fā)酵（或缺乏木糖發(fā)酵途徑）（3）氨芐青霉素 尿嘧啶合成  有核膜包被的細胞核 （4）葡萄糖和木糖 葡萄 利用木糖產(chǎn)生酒精，并且酒精濃度升高對木糖發(fā)酵無明顯影響。

解析試題分析：(1)常用的微生物分離方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。平板劃線法是用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線過程中將聚集的菌體逐步分散到培養(yǎng)基的表面。最終分離到由一個細胞繁殖而來的菌落；稀釋涂布平板法是先將菌液進行一系列梯度稀釋，再涂布培養(yǎng)。稀釋度足夠高的培養(yǎng)液涂布的結果可形成單個菌落。(2)以木糖為唯一碳源的培養(yǎng)基是選擇培養(yǎng)基，可以篩選出能利用木糖的酵母菌。(3)轉入質粒的大腸桿菌對氨芐青霉素有抗性，故可以培養(yǎng)在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上進行篩選。以缺乏尿嘧啶合成酶的酵母菌作為受體細胞，可以利用缺乏尿嘧啶的培養(yǎng)基篩選出導入質粒的酵母菌菌株。(4)圖示實驗結果表明，在葡萄糖大量消耗后，酵母菌仍能利用木糖快速產(chǎn)生酒精，說明轉基因酵母菌培養(yǎng)成功。
考點： 本題考查微生物培養(yǎng)相關知識，意在考查考生理解所學知識的要點，把握知識間的內(nèi)在聯(lián)系的能力和提取信息的能力。