Question

19．番茄中含有豐富的維生素，但不耐儲(chǔ)存．我國(guó)科學(xué)家將控制番茄果實(shí)成熟的基因?qū)�入番茄，獲得轉(zhuǎn)基因延熟番茄．操作流程如圖：
（1）過程①需要的工具酶有限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）和DNA連接酶．在篩選出含重組DNA的土壤農(nóng)桿菌時(shí)通常依據(jù)質(zhì)粒上的標(biāo)記基因的表達(dá)．
（2）為促進(jìn)圖中②、③培養(yǎng)過程的順利完成，通常需要在培養(yǎng)基中加入的調(diào)節(jié)物質(zhì)是生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素．
（3）要快速繁殖轉(zhuǎn)基因番茄植株，目前常用的生物技術(shù)是植物組織培養(yǎng)．該技術(shù)的關(guān)鍵步驟是脫分化和再分化．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，需要用同一種限制性核酸內(nèi)切酶處理含有目的基因的外源DNA分子和載體，以形成相同的黏性末端，再用DNA連接酶將目的基因和載體連接構(gòu)成重組質(zhì)粒．篩選出含重組DNA的土壤農(nóng)桿菌時(shí)通常需要依據(jù)質(zhì)粒上的標(biāo)記基因的表達(dá)．
（2）②是脫分化過程、③是再分化過程，決定植物脫分化和再分化的關(guān)鍵因素是植物激素的種類和比例，特別是生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素在植物組織培養(yǎng)過程中非常重要．
（3）快速繁殖技術(shù)就是指快速繁殖優(yōu)良品種的植物組織培養(yǎng)技術(shù)，因此要快速繁殖轉(zhuǎn)基因番茄植株，需采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，該技術(shù)的關(guān)鍵步驟是脫分化和再分化．
故答案為：
（1）限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）　DNA連接酶　標(biāo)記基因
（2）生長(zhǎng)素　細(xì)胞分裂素（二者順序可顛倒）
（3）植物組織培養(yǎng)　脫分化和再分化

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合圖解，考查基因工程和植物組織培養(yǎng)的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟；識(shí)記植物組織培養(yǎng)的過程及應(yīng)用，能結(jié)合圖中信息準(zhǔn)確答題．