Question

我國(guó)基因工程藥物的研制和生產(chǎn)發(fā)展迅猛，下圖是利用基因工程方法生產(chǎn)人生長(zhǎng)激素的示意圖。

根據(jù)上圖回答下列問題（限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端均不相同）：
（1）過程②必需的酶是__________________酶，過程④必需的酶是_________________酶。⑤為提高成功率，常用        溶液處理大腸桿菌細(xì)胞。
（2）為了使目的基因和質(zhì)粒B定向連接并且有利于受體細(xì)胞的篩選，酶1是           。
（3）如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ同時(shí)對(duì)質(zhì)粒A進(jìn)行切割，用一種酶、兩種酶和三種酶分別切割時(shí)，則形成的DNA片段共     種，含有完整四環(huán)素抗性基因的DNA片段的概率是_______。
（4）作為受體的大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)，應(yīng)不含__________基因，以利于篩選出含重組載體的受體菌。
（5）能否利用人的皮膚細(xì)胞來完成①過程，為什么？                              。

Answer 1

(1)反轉(zhuǎn)錄（逆轉(zhuǎn)錄） DNA連接酶   CaCl₂（2）EcoRⅠ  （3）9   1/3
(4)tct^R（四環(huán)素抗性）（5）不能利用人的皮膚細(xì)胞來完成①過程，因?yàn)樯�長(zhǎng)激素基因不在人皮膚細(xì)胞中表達(dá)，在垂體細(xì)胞中表達(dá)。

解析試題分析：
（1）過程②是指由RNA獲得DNA的過程，為逆轉(zhuǎn)錄過程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶；過程④為目的基因與運(yùn)載體結(jié)合成重組質(zhì)粒，需要DNA連接酶；⑤為把重組DNA分子導(dǎo)入大腸桿菌中，一般要用CaCl₂溶液處理大腸桿菌細(xì)胞。
（2）為了使目的基因和質(zhì)粒B定向連接，并且有利于受體細(xì)胞的篩選，限制酶I與另一端的限制酶PstⅠ不同，分析質(zhì)�？芍�，酶I只能是限制酶EcoRⅠ。
（3）用一種限制酶進(jìn)行切割，由于3種酶的切割位點(diǎn)不同，因此能得到三種DNA片段；用兩種限制酶進(jìn)行切割時(shí)，能得到六種DNA片段；用三種限制酶同時(shí)切割，得到的DNA片段共有三種，與用兩種酶切割后的片段重復(fù)，因此共得到9種片段；這9中片段中，有3種片段含有完整四環(huán)素抗性基因，所占比例為1/3。
（4）作為受體的大腸桿菌應(yīng)該不含標(biāo)記基因，由于amp^R基因被破壞，tct^R基因?yàn)闃?biāo)記基因，故受體菌中不含tct^R基因。
（5）不能用人的皮膚細(xì)胞獲取生長(zhǎng)激素mRNA，因?yàn)樵谌说钠つw細(xì)胞中生長(zhǎng)激素基因不表達(dá)，不能獲得生長(zhǎng)激素的mRNA。
考點(diǎn)：本題考查基因工程的有關(guān)知識(shí)，意在考查考生理解所學(xué)知識(shí)的要點(diǎn)，把握知識(shí)間的內(nèi)在聯(lián)系的能力。